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标题: 提过组蛋白的请进 [打印本页]
作者: xujie158    时间: 2011-11-25 08:56     标题: 提过组蛋白的请进

本帖最后由 xujie158 于 2011-11-25 08:57 编辑
4 j% @3 z/ l) l7 Q4 w4 {4 C) j/ W
- n# \9 |7 y! G9 X. o因为第一次提组蛋白histone，有些问题需要跟大家请教一下。$ J/ T$ L6 h# B# o$ ^
我提完组蛋白，跑了一个SDS-Tris-glycine胶，然后用考马斯亮蓝染色，现在H3、H2B、H2A、H4位置都与其大小相符，唯独H1大小不符，正常约21-22（根据pubmed上公布氨基酸序列计算得到），但从图上看应该在30-32左右，而且是两条带，我又查阅了文献，Nature protocol上的一篇文章显示，其胶图与我的结果一致。5 {$ ^$ Y; G% k. g7 c$ N7 |, t- i
我的条带图
7 ~2 l; C# d) v9 t Re-exposure of 20111122_1638.jpg-3.gif
! e3 H( j6 u0 }Nature中的条带图1 x' S6 W2 ~$ C7 F
未命名.JPG
8 A, D& @* e( {7 \- }/ m" |现在是请问谁能给我解释一下原因啊？
$ _; P! ]; B: d- U我想知道比较确定的回答，如果是回答诸如是不是有修饰啊？是不是有几种不同的type啊？就麻烦大家发个“顶”顶一下就好了，当然如果能够给出具体的原因另当别论。

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作者: shiyi    时间: 2011-11-25 09:50

Histone有乙酰化（acetylation）和甲基化（methylation）修饰，所以不是一条带而且比根据氨基酸序列计算出来的分子量大，你可以用H1抗体做western确认这两条带是不是H1。
作者: xujie158    时间: 2011-11-25 10:06

回复 shiyi 的帖子9 C1 c  x& I9 ]* v/ H+ W) X1 I* z
/ M# h1 f5 ?7 ^$ K
我查过几篇文献了，结果都是在那个位置，而且都是两条带，现在就是不确定里面具体的原因是什么。
作者: shiyi    时间: 2011-11-25 10:19

考虑用专门检测acetylation和methylation的抗体做western检测一下，或者把条带切下来做质谱分析。
作者: 274996064    时间: 2011-11-25 10:36

组蛋白的大小和他的修饰是密切相关的，我建议你用抗体做一下  ，  你提的应该没有问题
作者: eley    时间: 2011-11-25 10:40

给你个提示，有很大程度上，Histone是可以被酶降解的~~
作者: xujie158    时间: 2011-11-25 11:21

回复 eley 的帖子
0 t4 m( F: t" H4 a/ k" ^
# y  V1 K7 ^3 h9 N4 M9 i% f+ P; `已经解决，其实我知道是由于过度修饰造成的，因为只有这样的解释更加合理，但是却一直找不到合适的文献作为支撑，所以请教做过实验的人给出直接的原因，现在已经查到相关文献，附上一条% B$ ]- B. o. Q7 G: T0 F
未命名2.JPG - }" @$ D. b4 i9 x; x, ?
来源blood

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作者: xujie158    时间: 2011-11-25 11:22

谢谢大家讨论
作者: mayansen1314    时间: 2011-11-26 13:56

求阁下组蛋白提取及WB protocol，包括组蛋白裂解液配方，pvdf膜孔径，转膜电压电流及转膜时间，方便的话在给来点转膜液配方，不胜感激。
作者: xujie158    时间: 2011-11-28 08:02

本帖最后由 xujie158 于 2011-11-28 08:04 编辑 * U5 N: s2 k! T0 }
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回复 mayansen1314 的帖子4 ~& u% [+ R& R9 _7 |$ v
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不好意思，我们是公司的，可能不能给你有效的帮助信息，因为我们所用到的western试剂都是进口试剂原装的，所以配方我们不需要管的。我感觉如果一般实验室实验的话，不会用到我们使用的试剂，因为价格都比较高，平均我们做一个板的western成本在200元以上，并不适用于高校实验室使用，如果你当真需要的话我可以把商品货号给你。
' e6 c$ o: r# h$ L" R6 j我们转膜的话用的是半干转，似乎也不符合你的要求。3 p/ e" s& c# _# o
你可以网上搜索一下，信息很多的。



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