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标题: feeder MEF皱缩漂浮不知何故，求分析 [打印本页]

作者: 573639471 时间: 2011-12-4 15:44 标题: feeder MEF皱缩漂浮不知何故，求分析

最近一次取MEF，p0很好，但是传代后细胞皱缩漂浮不贴壁，用未传代的细胞换液，试过培养基没有问题，消化是0.25%的胰酶消化4min，怀疑是消化过度，换了0.05的胰酶，消化3-4min部分皱缩的时候就震，吹，下来一部分时就传代了，瓶上没下来的继续培养，结果可以，但是接下来一次的传代，方法照旧，仍然皱缩不贴壁。前面传代的灭活后，每天都有部分细胞死亡漂浮，有一瓶从第二天起就皱缩了，慢慢死亡，不知是哪里的原因？

作者: 郭小妹 时间: 2011-12-4 17:01

你第一次消化的胰酶浓度和消化时间确实都过了。我们做MEF，一般用0.05%胰酶消化2-3min，MEF对胰酶是很敏感的。灭活后每天都死一小部分应该是正常的，但如果大批死亡就不正常了。我觉得你因该考虑下你的原代MEF纯不纯，夹杂的上皮或神经细胞较多的话，不太好。

作者: w1986725 时间: 2011-12-4 18:53

消化不下来的细胞本身就是有问题的，是因为生长时间过长老化，或者几近凋亡，这样的细胞建议不要用了，培养效果不好

作者: majing217 时间: 2011-12-5 09:09

我觉得你消化的时间有点过长，如果在消化2分钟之后不能把细胞消化下来，证明细胞老化了，所以细胞在船只下一代时，细胞状态当然不好了，无论是生长的速度，还是贴壁的细胞都会有所影响。建议放弃细胞，重新培养。3 f+ i1 M5 e9 n* D; V1 ]

作者: znbr044 时间: 2011-12-5 14:26

回复 573639471 的帖子
6 h# ~2 [* [$ ]+ c* i
有可能是你交配的雄鼠，年纪大了

作者: song58 时间: 2011-12-5 15:00

MEF每代之间样多长时间呢？要是长过了，也会出现生长不正常的现象吧: k: T' g& c# ~! F+ v& g

补充内容 (2011-12-5 15:00): b/ J/ Y t7 t, m) |
养几天一代？刚才写错字了

作者: zheng19791221 时间: 2011-12-6 18:35

1、用未传代的细胞换液，试过培养基没有问题?如果用的还是P0代细胞，是检查不好培养基的，建议用其他细胞检测，确保培养基正常，PH正常。
2、是否考虑到培养皿或培养瓶的问题，这些检查都不能用原代细胞检查的。
3、胰酶消化时间长一些，一般也不会出现这样的问题，还是考虑细胞培养条件的问题。

作者: zhouxiangya 时间: 2012-2-13 13:55

我们也是用的胰酶原液，没有出现上述问题。我们的经验是细胞长密一点没关系，太稀的话细胞只长个头不增殖，而且状态会越来越差。

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