干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 关于人全长cDNA的获得 [打印本页]

---

作者: langziforever    时间: 2011-12-6 15:45     标题: 关于人全长cDNA的获得

我最近可能要做一个人基因（LRRK2）的表达，所以，我想问一下，大家是自己制备全长基因cDNA的吗？还是直接去公司购买的？我看了一下OriGene有卖，但是好贵啊，一个克隆质粒要2W多，有没有便宜些的公司卖？大家推荐一下啊，或者谁那有，能否友情赠送，我可以申请一下请你吃一个星期的饭，呵呵，多谢！

---

作者: Yedan    时间: 2011-12-6 15:54

取点细胞抽RNA反转cDNA自己P吧，国内很少有买现成的，不划算，自己做一个礼拜就做完了，吃一个礼拜的饭就省了吧...

---

作者: langziforever    时间: 2011-12-6 16:48

回复 Yedan 的帖子
- S. C- t  g. k- Q5 T
8 t9 z7 u- c- c: D6 @关键是全长的cDNA有7.5Kb，这么长一次反转录得到全长会不会很困难啊？

---

作者: wangyashuai    时间: 2011-12-6 17:35

全长cDNA不是说是一个载体中连全长cDNA，而是一个文库，包含许多载体，每个载体上会连一段cDNA，其中包含全部基因的拷贝。你只要建一个全基因组cDNA文库，然后从中间扩增你要的基因就行了。扩增全长cDNA主要是看mRNA两端的扩增能否实现，所以一些公司会在随机引物中加上寡聚的T，用以得到5‘的全长cDNA。

---

作者: hndxws    时间: 2011-12-6 18:00

我给你提供一个地方。厦门大学的韩家淮教授免费为大家提供人类的基因，只要他有的都会提供的，我已经要过好几个了，非常感谢他。这是个很好的科学家，不争名利，潜心研究，并为同行提供帮助，很让人钦佩啊。http://life.xmu.edu.cn/hancDNA/Query.aspx
1 H# `. g: i5 `索要基因时的要求是科研院所或大学的教育邮箱可以索要，商业邮箱不能索要。索要时有程序，按照网上提供的程序就可以了，免费的，邮费自付。我帮你查了，他有这个基因，你可以要得到。

---

作者: Yedan    时间: 2011-12-6 18:07

7.5kb是有点长的了，反转录肯定没问题，你找个高表达的细胞或者组织抽RNA吧，然后就硬着头皮P吧。GL

---

作者: ndwzf    时间: 2011-12-6 22:31

回复 Yedan 的帖子8 d; P( Q3 F! P' h

% G: W' x8 b/ @' b* ]$ D我想P的基因有9kb（不分段克隆），你有神魔好的酶和载体，能推荐一下魔？

---

作者: langziforever    时间: 2011-12-7 08:39

回复 wangyashuai 的帖子
5 s4 l3 V( n" ?/ y& F4 b$ n' O" J5 S: A3 L+ U& r
因为我要做表达，肯定是需要一个基因的全长cDNA在同一个载体上！

---

作者: langziforever    时间: 2011-12-7 08:40

回复 ndwzf 的帖子2 S/ Z; g& E9 L/ t5 L
7 s# C5 p+ H  }- Y* I
好像很多公司都有那种高保真针对长片段的酶！

---

作者: spchsq    时间: 2011-12-7 09:42

hndxws 发表于 2011-12-6 18:00 3 V9 L4 j4 t$ s
我给你提供一个地方。厦门大学的韩家淮教授免费为大家提供人类的基因，只要他有的都会提供的，我已经要过好 ...

  H9 D0 J1 X9 N+ }/ ^1 P8 d向这位韩教授致敬，希望有更多这样的科学家

---

作者: 不倒翁    时间: 2011-12-7 12:46

KOD的酶很好用 实在不行分段克隆吧

---

作者: Yedan    时间: 2011-12-7 17:03

回复 ndwzf 的帖子
' |2 v7 P, a. Y3 K
' {3 }! I8 K) v* ]* f9kb....肯定得用lenti的载体了，FUGW吧8 ?9 a$ ^: d( I8 M
至于酶，你问下Roche的人，他们有P长片段的，我用过还行，名字我记不清楚了...
2 `; k' _9 h, U4 i如果实验室有Taq和Pfu，可以1:1混合用，这样也可以做的，P长片段我经常这么干，但是别跟老板这样，会挨骂的...

---

作者: ndwzf    时间: 2011-12-8 19:57

回复 spchsq 的帖子  }0 \+ ^% `* B5 |- [% R1 r

/ C. n1 Q* Q* g# \+ a* Z6 v& M7 j怎么要呢？

---

作者: zhangxl85    时间: 2011-12-8 21:57

回复 hndxws 的帖子
$ `0 k$ l! ~% d
* A9 }. R2 u" d5 U( r真不错，谢谢！

---

作者: spchsq    时间: 2011-12-10 10:38

回复 ndwzf 的帖子
& t! J( j- k! J
& u' d4 G+ _# d. n+ X! V( |看前面hndxws的贴子上有链接

---

作者: zhuyin2010    时间: 2011-12-17 09:57

回复 hndxws 的帖子" N0 o$ C* b7 ]# X4 V& ]8 {- o

3 r, `% S# f; g  m# f. C我也想告诉他这个。9 U4 }' e7 ?% b; J
你抢先了。3 g2 \; n2 K! {; r7 d
其实自己扩也是没问题的

---

作者: langziforever    时间: 2011-12-19 19:56

谢谢大家，也谢谢这位韩教授，希望国内的所谓科学家们多发扬这种真正的科学精神！

---

作者: 莫大山    时间: 2015-6-18 15:36

你好，我刚向韩家淮实验室索取了一个cDNA，后续想做过表达，但是关于这个菌液我还有一些不懂得地方，想跟您请教一下。1 B( J6 Q! E- U/ O% b+ X
首先，这个菌液的载体信息我没办法获得，怎么进行测序呢？% X8 r; b. p4 y. z3 W& K5 ?
其次，没有载体信息，我如何设计空载体进行对照呢？

---

作者: 莫大山    时间: 2015-6-18 15:41

你好，我刚向韩家淮实验室索取了一个cDNA，后续想做过表达，但是关于这个菌液我还有一些不懂得地方，想跟您请教一下。- \. u3 _" T, W& F& F
首先，这个菌液的载体信息我没办法获得，怎么进行测序呢？/ p4 z3 T5 ~1 {1 `0 J
其次，没有载体信息，我如何设计空载体进行对照呢？

---

作者: yuanyecat    时间: 2015-6-18 16:32

你那个基因有多大，做全基因合成呢？Life tech 好像有做

---

作者: 细胞海洋    时间: 2015-6-19 12:00

回复 莫大山 的帖子
* @3 m  z6 H0 ]2 N
5 Q" z0 H, N; Y建议你发新帖提问

---

作者: yuanyecat    时间: 2015-7-2 14:39

做全基因合成怎么样？Life tech可以帮你做。你做逆转录做不到吗？能否做逆转录然后拼起来呢？

---

欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)

Powered by Discuz! X1.5