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标题: 继续发帖，求帮助!小鼠msc不长的问题 [打印本页]

作者: zhuzhoujie24 时间: 2011-12-7 18:22 标题: 继续发帖，求帮助!小鼠msc不长的问题

10%四季青加DMEM/F12，细胞孔板里面有巨噬细胞，没有用离心纯化，细胞养了十几天都不长！求大家帮忙想想对策

作者: meister 时间: 2011-12-8 08:44

换血清

作者: mason658616 时间: 2011-12-8 09:00

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能不能说的详细点，你是用的直接贴壁法？不长是指没细胞贴壁，越来越少，还是很多贴壁的没有变成长梭形的？

作者: zhuzhoujie24 时间: 2011-12-8 19:29

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万分感谢您百忙之中抽空回贴，我是直接将骨髓打到孔板里面贴壁的，不长不是说细胞贴壁变少，细胞没有死，但是生长极其缓慢，先是细胞为梭形的，长到后来（大约2周后）就展开了看不到明显的细胞形态。

作者: zhuzhoujie24 时间: 2011-12-8 19:30

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请问您用的是什么血清？

作者: meister 时间: 2011-12-9 09:32

回复 zhuzhoujie24 的帖子- d/ @- b" ]1 ]- p5 q( ?3 E6 _$ i# x

PAA的

作者: mason658616 时间: 2011-12-22 13:10

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全髓法一般3天左右细胞长出，一周传代，长两周还不传代确实是增殖缓慢。接种浓度也很重要，我做Ficoll法一般是10^5~10^6/ml，全髓法还要摸摸条件，细胞太少肯定不行，长不起来，血膜太厚又容易在洗的时候把贴壁的细胞带下来。血清我用的是Gibico的，3000左右。血清浓度10%。也有人原代用15%，传代后改为10%。血清浓度高了容易出现分化。骨髓的MSC个体差异较大，多做几次，别灰心

作者: zhuzhoujie24 时间: 2011-12-24 22:31

回复 mason658616 的帖子8 i# P1 h8 h7 E8 o1 q
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感谢您对我的建议，但是您说的血清太贵了，我们实验室条件不允许。我正在努力想办法，祝您天天好心情！

作者: weisong1015 时间: 2011-12-25 11:58

这种条件我也遇到过，对于小鼠的骨髓间充质干细胞，它非常娇气，要用专门的培养基，从stem cell 购买的。要是还查不到的话，我可以把我买的货号发给你

作者: yinjiqingqq 时间: 2011-12-26 10:56

1. 使用国产血清养骨髓MSC不靠谱，我记得有文献做，成功率仅50%# ~: i. O$ t( y6 t$ ]% P
2.细胞密度是否太稀了

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