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标题: 紧急请教一个关于转染细胞蛋白表达所需时间的问题！！谢谢！ [打印本页]

作者: webber43 时间: 2011-12-25 20:32 标题: 紧急请教一个关于转染细胞蛋白表达所需时间的问题！！谢谢！

请教各位大侠，在pMX载体上连接目的基因，用lipo2000转染293T细胞，什么时候能够在细胞内表达该蛋白啊？？我做的GFP阳性不到一天就有比较强的荧光了。问了师兄师姐，他们说这个跟蛋白大小有关，我的蛋白大小50KD左右，不知道1天的时间会不会有表达啊？？
要外转了去做IF的，要是没有表达，我就悲剧了哦！！2 l# d) V: v2 Q. V. {2 r
谢谢各位啊！！

作者: Yedan 时间: 2011-12-26 01:24

本帖最后由 Yedan 于 2011-12-26 01:25 编辑 Z4 Z/ i1 K0 l) G
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LZ我先说句题外话啊，为什么要用pMX做过表达呢?你把pMX转293还不如pcDNA之类的载体表达量来的高。还有，我不知道是不是我理解错误了，你想说的是用pMX包的retrovirus然后感染目的细胞，GFP 1天就亮了。那你对应的蛋白也应该表达了，我做的时候检测postinfection 48h 目的蛋白就已经overexpression了

作者: zxcv12345 时间: 2011-12-26 08:03

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很正常，转细胞的话，6小时就可表达蛋白

作者: gandanxiaoyang 时间: 2011-12-26 09:29

一般说来，24-48h后，蛋白表达就比较强了。24h后做免疫细胞荧光，应该没问题的！

作者: webber43 时间: 2011-12-26 21:56

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呵呵，因为实验室有现成的连有那个基因的载体，我就嫌麻烦，没有换其他载体直接转了。好像转染以后，蛋白小的表达快些，大的蛋白表达慢些吧，我也不知道为什么，希望有牛人指导啊！！

作者: webber43 时间: 2011-12-26 21:57

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恩，非常感谢！那这样我就放心了，呵呵

作者: webber43 时间: 2011-12-26 21:59

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也是，protocol上说的是转染48小时以后收细胞，估计48小时以后蛋白的增加就不显著了吧？

作者: eley 时间: 2011-12-27 09:01

这个1天就可以了，时间长了，蛋白量会积累，看你的目的了。
如果是做IF我认为1天就足够了，如果要做WB可能要的蛋白量比较多，不过这样的话，2天也是足够足够。我以前的蛋白300K，2天就表的非常好了~~~

作者: webber43 时间: 2011-12-27 09:22

回复 eley 的帖子* J9 @8 _6 s, e2 _. j

恩，非常感谢，期待阳性结果的出现呵呵

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