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标题: 培养干细胞要加双抗不？ [打印本页]

作者: hesu1105 时间: 2011-12-26 17:24 标题: 培养干细胞要加双抗不？

本帖最后由 hesu1105 于 2011-12-26 17:25 编辑 8 w) g: S' L9 T. o& W

在网上的文献有的说培养干细胞可以不用加双抗，说是对干细胞有伤害。可是实验室又是要求要加双抗的，具体原因也不清楚，有知道的或者在这方面有经验的吗？请教下，尽量说的详细点，谢谢！

作者: genedu 时间: 2011-12-26 19:07

绝对可以加双抗，不仅可以加双抗，还可以加双性霉素来抑制真菌污染. Q5 S3 ?+ w8 ?* J) z# N! }1 I
但是在电转的时候最好不要加双抗7 S; K7 ~# p" n" `
双抗的浓度可以参考成纤维细胞的浓度，或者减半都可以达到抑菌的效果

作者: yangpan521 时间: 2011-12-26 19:36

双抗仅仅是是起到抑菌的作用，实验室无条件非常好时，不加双抗是没问题的。如果环境条件一般还是加上为好，防止污染，

作者: sanfa 时间: 2011-12-26 21:20

建议加不然太容易污染了 1%就可以了

作者: aminhair 时间: 2011-12-26 22:42

确实有文献报道说抗生素可能对ES产生负面作用。Antibiotics Reduce the Growth Rate and Differentiation of Embryonic Stem Cell Cultures。但你也知道，实验要取其利，避其弊。既想保证不污染，又想减少分化，怎么办？找个合适的浓度呗。得道一个平衡点。看你的实验要求了。

作者: bjman10016 时间: 2011-12-26 23:31

可以加啊

作者: 大少爷 时间: 2011-12-27 08:33

主要根据你的实验室条件，双抗是起到抑菌的作用，实验室条件非常好时，不加双抗是没问题的。

作者: eley 时间: 2011-12-27 08:58

不要加双抗，这就是刺激了。。。要求很严格的~~6 U& }$ x5 s5 ?
还有就是你是人的肝细胞还是鼠的肝细胞啊？

作者: yuwenlan 时间: 2011-12-27 09:36

如果原代培养，肯定要加，而且往往使用“抗生素-抗真菌素”，甚至取材前的标本还要视情况碘伏浸泡。* a- n* V4 R F4 }7 Z: i2 g
如果细胞状态稳定了，实验室条件够的话，完全可以不加抗生素了。不放心的话，可以改用“青链霉素”或是“四环素”等等多种选择。
如果细胞要转染什么质粒，病毒等，要撤掉抗生素，抗病毒药。：）

作者: dyg108 时间: 2011-12-27 09:51

实验室条件还可以，从来不加双抗，没有过细菌污染。当然，如果实验室条件不好可以加。这个问题得视情况定。
不过，个人认为双抗的作用并不太强，如果不注意该着的还是着，如果注意了无菌操作问题，一般不会有事。6 r9 e% R1 ^* X; L! i1 @
但，做原代的时候再清洗液里可以加双抗，这样影响不会太大，又能抑制细菌增长。

作者: hesu1105 时间: 2011-12-27 11:19

不是肝细胞，培养的是人的胚胎干细胞，原代时用的浓度是传代时的二倍。实验室的条件是很好的，达到100000级的，不过前面的人做实验摸索的结果还是加了双抗的。我们又不敢随意更改公司的操作流程，除非有实足的把握，不然是要倒霉的啊。

作者: happyab 时间: 2011-12-27 12:03

如果你能在高级无菌室就可以不用，不然还是建议你加！如果怕对实验结果有影响，建议采取严密一些的措施，如空气高级消毒、减少不必要的操作！

作者: youtellme 时间: 2011-12-27 16:50

可以加，但要标明是加哪两种抗体的，以免影响结果。也可以做个对照啊。

作者: happyab 时间: 2011-12-27 18:05

可以不加就不加，怕影响试验结果！但如果无法保证试验环境的可控，就要加！
建议在高级的无菌室操作，而且操作时间动作必须控制，减少暴露而被污染几率！% n8 a! u- h* L
如果不想加，又无法保证可以在高级的无菌室操作，建议采取预先密封消毒措施！

作者: yinjiqingqq 时间: 2011-12-28 11:19

个人愚见：你可以分两组一组加双抗，另一组不加。你们的实验环境达到十万级标准，如果操作得当，环境污染的可能性很小。关键是你的样品原代取材是否是无菌的。你的细胞原代就加有双抗，建议你不要立即撤掉，换液时双抗浓度减半，观察几天，确保细胞无污染再逐步减少浓度。

作者: hesu1105 时间: 2011-12-28 15:16

回复 yinjiqingqq 的帖子
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原代取材时在实验室外部进行，环境条件比较差，无法做到无菌要求的，所以是加双抗培养的，但培养到传代时应该可以不加双抗了吧。我是担心有双抗的细胞株会不会产生分化之类的影响，还有在产品进行医疗时会不会对患者产生负作用呢？

作者: 新疆八钢 时间: 2011-12-28 15:32

回复 hesu1105 的帖子
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一般情况下，如果没有特殊要求，可以加双抗；如果双抗干扰你的实验目的，那不能加双抗，双抗的浓度一般各为100u/ml。双抗不能代替无菌操作，加双抗是为了预防污染，一定要注意无菌操作。如果你的实验步骤加多，感染机会较多，一般应该加双抗预防感染。

作者: sijicc 时间: 2011-12-28 15:40

不做治疗就可以加

作者: yinjiqingqq 时间: 2011-12-29 10:18

回复 hesu1105 的帖子, L$ p! S p7 {# y3 z. ^3 |2 g

如果你是做医疗的话，就最好不要加，如果原代加双抗，你可以在后期传代中逐渐把双抗撤掉。

作者: llecstem 时间: 2011-12-30 10:28

根据实验室条件，现在的实验室没有缓冲间不加的话很容易染菌，以前不加啥问题都没有5 m2 K! V0 G: R$ {$ l. `0 o

作者: yanlu98 时间: 2011-12-30 17:08

要加啊！我养过唯一一次污染的就是因为没有加双抗！

作者: shashou_com 时间: 2012-1-29 20:22

看你实验室怎么样啦。实验室好的话，就不需要加双抗，我就没加过。

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