干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: （汇总）常用试剂保存条件： [打印本页]

作者: youtellme 时间: 2011-12-28 17:11 标题: （汇总）常用试剂保存条件：

本帖最后由细胞海洋于 2011-12-29 00:20 编辑 % e- l4 g0 _8 P& j4 D( G+ c
& D% t2 P5 Y0 K# u* Y
期望大家把自己实验室使用过常用细胞培养试剂，包括名称，及配制方法、用量及保存条件分享交流一下。) L  |" j4 }# n& g1 s
我先来bFGF,MEM稀释，50ng/ml,4度避光保存。( L$ V2 X) P1 G( i3 v+ P- R
         DMSO，分装小冻存管5ML一管，按需使用，与完全培养基配成10%，4度平衡30分钟。3 d# V1 t' e  J8 A! H% R
         异丙醇，室温，无配制，避光保存。
         青毒素，－20度保存，因为不用，具体量也不清楚。
其它的希望大家来给补全，谢谢！

作者: 冰枫de梦 时间: 2011-12-28 19:56

胎牛血清，-20度保存。灭活后10ml分装，然后-20度保存，避免反复冻融。

作者: aulenuyah 时间: 2011-12-28 21:40

胶原酶，一般用无血清培养液或PBS配制，浓度为0.1~0.5%，最好在低温条件下配制，配制完成后用过滤除菌，-20保存。解冻时低温解冻。

作者: 白巧克力 时间: 2011-12-28 21:53

这个帖子好！matrigel,-20°保存，只能4°化开，包被的移液管可事先置于4°，操作过程中，避免温度过高操作过久而使包被不均匀。

作者: zxiaoxiao311 时间: 2011-12-28 23:14

异丙醇，我们实验室的保存方法是4℃冰箱，避光保存；青链霉素，一般配制完全后，分装Ep管，置-20℃保存，临用时解冻

作者: NK细胞 时间: 2011-12-29 09:20

胰酶0.125%浓度，用量根据细胞量，一般T75的瓶子2ml，常用的话4℃保存，不常用的话-20℃保存。可以分装，避免污染。

作者: youtellme 时间: 2011-12-29 10:19

谢谢！大家支持，希望大家越多，我会把所有人的回复到时候汇总，完整呈现给大家。

作者: weisong1015 时间: 2011-12-29 10:23

地塞米松，甘油磷酸钠，避光保存，4度。
丝裂霉素，避光保存，-20度保存

作者: youtellme 时间: 2011-12-29 22:23

PBS Buffer ,室温，137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 ，去离子水至1L。9 K1 \/ n2 t& W9 h; u
10mg/ml牛血清蛋白(BSA），加100mg的牛血清蛋白加水定容到10ml，贮存于-20℃。% [3 A( S* X! q8 }, q7 F( I
1mol/L HEPES，将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

作者: 南宫燚岚 时间: 2011-12-30 09:15

回复冰枫de梦的帖子

不一定都要灭活吧，得分细胞类型，按需灭活

作者: meridian 时间: 2011-12-30 09:23

回复南宫燚岚的帖子1 x( }9 W3 v. C
, Q: V7 O& K2 t; H9 v% Y2 O' Z
也不见得，不是分细胞，而是购买的血清已经处理方式，一般是4℃溶解，57℃30 min灭菌，但是像我们使用的HyClone的南美胎牛血清就无需灭菌，只需4度溶解（很重要，不然室温溶解产生大量蛋白沉淀）

作者: liulzm8004 时间: 2011-12-30 10:02

我们实验室谷氨酰胺统一配好后，根据配置培养液的用量进行分装。一般每支8ml，做好标记，放入-20度冰箱保存。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4度放置一周可降解50%。注意！

作者: 冰枫de梦 时间: 2011-12-30 10:21

回复南宫燚岚的帖子
* j6 C' p. p# P$ t
对，是这样的。具体有什么样的讲究我也不清楚

作者: youtellme 时间: 2011-12-30 11:40

回复南宫燚岚的帖子# K5 q8 b4 C/ a: {) d: W

是的。

作者: 南宫燚岚 时间: 2012-1-4 09:03

回复 meridian 的帖子
& J) [$ x4 v9 N' m7 f
恩，是否需要其实问问厂家就行了……

作者: dongxin 时间: 2012-1-9 14:36

本帖最后由 dongxin 于 2012-1-9 14:39 编辑 " l4 _% l9 y# x, R

补充两条
0.1%Gelatin: 0.5克Gelatin溶于500mLPBS，121度灭菌30分钟，4度保存备用。
Ⅳ胶原酶（5mg/mL）:100mgⅣ胶原酶溶于20mL DMEM/F12,0.22微米过滤，分装存于-20度备用。

作者: bin 时间: 2012-2-10 15:12

各种细胞因子应先配成使用浓度的500或1000倍，用DMEM或者PBS配制，配制过程要防止污染，因子一般都很少不用过滤，然后按50或100ul分装，-20度冻存，使用前室温化开，用完后马上冻于-20。: \3 D+ N: D* S; g: a
谷氨酰胺一般按100倍配制，PBS或生理盐水配制，过0.22um滤膜，1.5mlEP管分装后-20冻存，使用前化开并混匀（低温时谷氨酰胺会重新变成粉末沉于管底），用完后马上冻存。

作者: menghy 时间: 2012-2-10 16:13

现在进口胎牛血清已经不需要灭活了，至于小牛血清和新生牛血清是否需要灭活还是需要咨询购买厂家。 f" O% Y5 w. U" _
但是楼上说的4℃溶解确实很重要，我们实验室已经反复验证了很多次，室温溶解的会产生蛋白沉淀的。500ml的溶解后分装包装一定很重要，避免污染和反复冻融影响效果。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)