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标题: 大家养的大鼠MSC怎样消化的？？？ [打印本页]

作者: bnm789 时间: 2012-1-3 22:15 标题: 大家养的大鼠MSC怎样消化的？？？

大家养的大鼠MSC怎样消化的？？？加不加EDTA，加EDTA消化后离不离心？

作者: 天山飞鹤 时间: 2012-1-4 08:42

2.5%胰酶+EDTA，培养箱中消化2min, 前面两次因为细胞不纯，消化时间可以延长，后面随着细胞变纯，越来越容易消化，担心EDTA对细胞的影响，可以将胰酶稀释一倍但需延长消化时间

作者: wangzhiqi86 时间: 2012-1-4 10:02

0.25%胰酶+0.02%EDTA，如果单纯的只是传细胞，那看到细胞像沙状从培养瓶底部流下时，就可以加含有血清的培养基中止消化了

作者: signext 时间: 2012-1-4 11:30 标题: RE: 大家养的大鼠MSC怎样消化的？？？

天山飞鹤发表于 2012-1-4 08:42 8 k- ?6 }* e- p
2.5%胰酶+EDTA，培养箱中消化2min, 前面两次因为细胞不纯，消化时间可以延长，后面随着细胞变纯，越来越容易 ...

! |' [ L# @ o |4 e2 F
"前面两次因为细胞不纯，消化时间可以延长"8 n" L3 `! Q$ Y! s
我的理解是原代细胞因为帖壁更牢固，所以要多消化一段时间，我一般是4分钟
而后面的不要消化超化两分钟，因为纯化MSC的方法就是靠传代，6 H9 N0 T) T$ ?
很难消化的那些都不是干细胞，消化嘛意思意思就可以了干细胞很好下来的

作者: sanfa 时间: 2012-1-4 12:43

gibco 的0.25消化2分钟

作者: bnm789 时间: 2012-1-4 13:08

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3 z) _3 ~3 D8 G% v4 b
请问加多少ml，

作者: 天山飞鹤 时间: 2012-1-4 13:41

回复 bnm789 的帖子5 C/ b, e, }4 L9 `+ R

我一般2-3ml就够了

作者: bnm789 时间: 2012-1-4 13:44

本帖最后由 bnm789 于 2012-1-4 13:45 编辑 2 D9 Q' y/ ]0 R6 a

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/ ]5 X0 K* O1 S, O. H' z+ T
多大的瓶子 25平方厘米的吗，还是75的？

作者: 天山飞鹤 时间: 2012-1-4 13:45

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但我养的时候，如果前面也只消化2-3min，消化下来的细胞量极少，后面传代就太慢了

作者: 漫游天龙八部 时间: 2012-1-4 14:01

0.25%胰酶+0.02%EDTA1ml，25cm2，然后显微镜下观察，消化程度根据实验要求自己判断，不规定具体时间。

作者: 天山飞鹤 时间: 2012-1-4 14:17

回复 bnm789 的帖子$ o, @! ~/ c$ m% {7 g8 C3 ^

25的

作者: signext 时间: 2012-1-4 15:03

天山飞鹤发表于 2012-1-4 13:45 6 E" d1 v& d b
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5 d! x3 e6 s- D) A0 p9 {& [( _) O6 J1 f* o7 k$ R5 L. Y8 Y
但我养的时候，如果前面也只消化2-3min，消化下来的细胞量极少，后面传代就太慢了

是啊会这样的 9 K9 d( A% }. u
摸索着控制吧传代过程就是纯化过程

作者: andreqin 时间: 2012-1-4 15:08

不用EDTA一样很不错，0.25gTRY+100mlPBS.这个主要是要看PBS的PH值。偏碱性的比较容易消化。中性最差。我都是用PH=7.6的。很好消化的

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