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标题: 急！急！急！急！CIK细胞实验中出现的问题？？？？ [打印本页]
作者: hwlightning    时间: 2012-1-19 10:55     标题: 急！急！急！急！CIK细胞实验中出现的问题？？？？

最近养CIK细胞，细胞总是贴壁，悬浮细胞也少，加入CD3和IL-2好像没起到作用，/ i) L! _' G5 n, c! A
一直贴壁，吹不下来。
  a, p4 K: O& @: f5 ]CIK细胞不是悬浮的吗？为什么会还含有那么多贴壁细胞，如果贴壁细胞多，悬浮细胞就少，成团就会更少，和面再补加一支CD3也不起作用。: c  Y9 S. e; t9 ^
还有一种情况是细胞一直不会扩增，养着养着就会凋亡，细胞团也会凋亡，这会是什么原因？
作者: ly200101042    时间: 2012-1-19 11:18

我也遇见过这种情况 而且有时候细胞贴壁还变型了3 ^( [5 d* M5 C6 z
是不是细胞太多太挤了啊 有时候我要是分的细胞多 就会出现这种情况啊
作者: hwlightning    时间: 2012-1-19 11:50

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* j" d6 F, i8 k
' Y' }! m" \0 n2 R* o: oCIK细胞应该是不贴壁的，也不会因为细胞多而变型，你分离的时候是不是红细胞很多，
& m" R# d; p; e5 {5 J  J) }! h想过怎么去除红细胞没？
作者: ly200101042    时间: 2012-1-19 12:00

我用过溶血素 但有时候嫌麻烦啊
作者: woosheng    时间: 2012-1-19 22:24

本帖最后由 woosheng 于 2012-1-19 22:29 编辑
9 ?: h& E* i/ ?7 h+ `2 D# C+ g/ R2 v5 j
可能是单核细胞。PBMC里有除了淋巴细胞以外还包含有单核细胞。单核细胞容易贴壁，分化成DC和巨噬细胞。* J$ Z0 ?! F% K7 w  h* ]1 x- y: O
加CD3抗体和IL-2是没有用的。
作者: lyj-0017    时间: 2013-6-16 16:36

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* x2 Z' \0 w# C/ H3 V+ {
$ p0 _3 |2 @- a* J你好，我们现在培养CIK液出现你说的这种情况。培养几天后，培养基颜色根本不怎么发生变化，培养液中也有絮状物，像是细胞成团，最后收集的数量非常少。你们现在这个问题找到原因了吗？是如何改善的呢？
作者: ljl1988115    时间: 2013-6-17 10:12

单核细胞比较多吧
作者: meister    时间: 2013-7-18 15:33

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& S. {* H% J5 U0 m# [6 K, K% X+ Y% R+ h1 v) O$ t
细胞不长，出现许多絮状，是细胞死了！
作者: lyj-0017    时间: 2013-7-18 18:55

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& D0 V1 H$ c9 M/ w, q
$ r. V0 A2 r) r那么，细胞为什么会自己死掉了呢？是细胞因子没起作用？还是因为营养不足呢？或者别的什么原因？
作者: meister    时间: 2013-7-19 08:13

回复 lyj-0017 的帖子. C7 W8 p, v" n) c+ N9 z& [  U

; S9 R! h3 Z" ~* S细胞会死掉，主要是两个原因， 一是培养基问题。 二是细胞密度过高。" n$ C# \4 `! H2 d
我估计你的是培养基有问题。看看IL-2是不是降解了。
作者: DannyXia    时间: 2013-7-19 08:21

可能是单核细胞。CIK是悬浮的。
作者: lyj-0017    时间: 2013-7-20 12:43

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6 k. `. O3 j  O# U
* m1 n0 y, r' M+ P$ ~/ Z/ L4 BIL-2降解？这怎么检查IL-2是否降解呢？我们把IL-2加入培养基后一般三四天就会全部加完，平时放在4度冰箱保存，IL-2在这段时间难道会降解吗？5 w$ H! W; B' l) ]* d/ w
另外一个，会不会是细胞在增殖较多，而在此之前并没有添加够足量的培养基而导致细胞死掉呢？（也就是你说的细胞密度过高）
作者: meister    时间: 2013-7-22 15:10

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因子降解不容易检测。 所以因子要分装， 避免反复冻融。 会不会是细胞密度太高，营养不够就不好说了， 得自己观察。
作者: woosheng    时间: 2013-7-22 21:07

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说的有道理。仔细观察贴壁细胞，会发现有两种细胞。一种胞体纤细突起多，另一种胞体大突起少。这两种应该都来自单核细胞，会防碍淋巴细胞增殖。
作者: lyj-0017    时间: 2013-7-22 22:51

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. _+ |2 B* m$ K1 n' ~
! J7 m8 m0 t" s( H1 r0 u/ ]嗯，也没别的办法，只能平时多观察多比较了，非常感谢
作者: jingjing6837    时间: 2013-8-27 14:23

我养CIK也出现过这种问题，多数是因为单核细胞贴壁的原因，一开始应该先贴壁1.5小时去除单核细胞，然后收集淋巴细胞，在培养的时候如果贴壁细胞很多，要更换培养瓶弃掉贴壁细胞调整细胞密度，这样CIK不会受到影响，可以扩增起来
作者: kangyi08321    时间: 2013-9-10 16:07

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, K; W5 v4 L1 D0 i/ M  d  O( u; M# @. M2 m1 R
如果你用的是自体血浆啊，如果是自体血浆没有灭活去除血浆中的纤维蛋白原的话，在培养过程中，会出现纤维蛋白原凝结（原理同血液凝固），细胞会被纠缠起来死掉。用自体血浆的话还是先灭活下吧。同胎牛血清灭活补体一样。只是我不知道会不会灭活掉血浆中的一些有效成分，有没有大神在这方面有研究，请指教！
作者: 匿名    时间: 2013-9-16 11:22

回复 hwlightning 的帖子' w% @1 B7 V( I1 m" P* y. H4 y( u
/ i& `  r. z* O' i3 Y
你好，最近养CIK细胞，细胞总是贴壁，悬浮细胞也少，加入CD3和IL-2好像没起到作用，
: _& ?: @+ e3 K+ ^5 w一直贴壁，吹不下来，没有克隆团产生。CIK细胞一直不会扩增，养着养着就会凋亡，，这会是什么原因？
8 E! l% `- S! R+ ~. B/ \+ N" ?: ~& s) p2 D8 A# a3 {& n" j
我的问题跟你去年碰到的情况一样，不知道你解决了吗，能告诉我问题出在哪吗？



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