干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 胶原酶、accutase还是dispase？ [打印本页]

作者: sizhengliu 时间: 2012-2-6 21:25 标题: 胶原酶、accutase还是dispase？

请教大家，在做ips传代消化时，选用哪种消化酶（胶原酶4、accutase还是dispase）性价比好？
4 l' x5 r/ ]- Q
补充内容 (2012-2-6 21:26):
你们一般用哪种呢？

作者: sino85196488 时间: 2012-2-7 08:40

dispase比较温和一些，我们一般使用dispase

作者: zhusealin 时间: 2012-2-7 09:48

有饲养层培养的时候，我们一般用胶原酶4。无饲养层培养用dispase消化

作者: dianying 时间: 2012-2-7 10:00

回复 sizhengliu 的帖子 x0 g7 @( y* M7 B/ {4 {
4 u$ p# m/ ]" r$ A1 r
我用dispase。

作者: sizhengliu 时间: 2012-2-7 15:06

回复 zhusealin 的帖子' `- k4 G6 {' {/ Y+ \
' v9 J. I% O; v t% C2 G
你好！为什么要分有无饲养层呢？

作者: sizhengliu 时间: 2012-2-7 20:48

回复 sino85196488 的帖子
8 p/ r7 f3 H; Y* u* z7 r
你好！dispase是不能被血清终止消化的吧！你们用什么终止消化呢？

作者: zhusealin 时间: 2012-2-8 06:44

用洗几次的方式去除，因为dispase的作用比胶原酶4要强点，无饲养层的时候细胞贴壁比有饲养层的时候要牢，所以无饲养层用dispase消化

作者: sizhengliu 时间: 2012-2-8 15:59

回复 zhusealin 的帖子& G4 P$ h2 ~4 n, `6 V( m
. E$ {1 C% v9 A/ ^8 I
谢谢！你说的“洗”是离心去上清？还是其他方法？

作者: zhusealin 时间: 2012-2-8 16:47

就是去上清

作者: Dongqin11 时间: 2012-8-27 17:25

请问，Accutase是胰酶消化液吗？

作者: Dongqin11 时间: 2012-8-27 17:38

已找到Accutase包含了蛋白水解酶和胶原溶解酶，但是还是想问一下，它和0.05%Trypsin相比温和度怎么样？

作者: 也行天下 时间: 2012-8-28 06:21

回复 Dongqin11 的帖子5 K9 g1 R. D% q( h$ p4 ^0 q# |

accutase要比0.05%胰酶温和，但比胶原酶要强得多，比dispase也强，accutase是将iPS克隆消化成单细胞，我们在制作EB时用，饲养层和无饲养层培养的iPS细胞传代都用胶原酶。

作者: lchanlon 时间: 2012-9-22 10:10

if you culture ips cells in feeder, the collagenase IV is a good choice. But for feeder free, Accutase and dispase is not good. I suggest you use 0.5 mM EDTA in PBS. for 33mm dish, add 2ml of 0.5 mM EDTA, incubate at room temperature for 3-5 minutes, aspirate the EDTA. Then add 1 ml of medium using 1 ml pipet, pipet up and down to disassociate the ips cell and transfer into a new tube.

补充内容 (2012-9-22 10:12):: a) G3 ?1 r$ q1 v" b n
In our lab, it works well. this protocol from James A Thomson laboratory

作者: sizhengliu 时间: 2012-9-23 08:45

回复 lchanlon 的帖子
: D6 ~2 h, p' d! U2 K7 C
thank you vary much!

作者: shuishan 时间: 2012-10-23 16:40

Accutase是胰酶的替代品，是含EDTA的PBS溶液) a3 y7 M5 v$ e) m! o) |

作者: 第一心音 时间: 2012-10-23 16:58

经典的，胶原酶，不过要饲养层，不知道能不能帮助你

作者: bubble_w 时间: 2012-10-25 20:41

回复 sizhengliu 的帖子
2 C6 T5 q2 B5 {" c/ A' ~3 G" H
小鼠的iPS选择胰酶或者accutase消化，人的iPS选择胶原酶4或者dispase，dispase消化的效果最温和了。我一直在用accutase，这个酶消化完的细胞是小的细胞团块，3个细胞左右，非常适合小鼠干细胞高比例传代，37度作用2-3分钟，消化程度刚刚好。accutase和dispase，gibco都有成品，买回来分装后就可以直接用，非常方便。accutase大概800左右，dispase貌似要3000？我记不清楚了。

作者: sizhengliu 时间: 2012-10-26 22:15

回复 bubble_w 的帖子
/ ]; l3 R7 D. D l+ h5 ^$ R- n
谢谢你的详细解答！我做人的ips，请教：胶原酶4的配置液体和使用浓度是什么？

作者: sizhengliu 时间: 2012-10-26 22:18

回复第一心音的帖子

是的，请教：你认为在人的ips传代中，有必要去除feeder吗？

作者: bubble_w 时间: 2012-10-29 09:50

回复 sizhengliu 的帖子
0 e3 H. z: b' f' c! O( n( _
用DMEM/F12 1:1 配置胶原酶4的工作液，工作浓度是1mg/ml。配置的量看你养细胞的数量了，可以配置30ml的工作液，分装为1ml，与-20℃保存，每次解冻一只使用，这样消化的效果好。

作者: hjd8886 时间: 2012-10-29 11:43

我们实验室用的是EDTA啊，37°消化5分钟就好了。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)