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配维生素C
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作者:
huangcong1988
时间:
2012-2-13 16:10
标题:
配维生素C
刚订了sigma的维生素C，想配成Vc的母液，但是不知道配Vc母液应该注意哪些（用培养基配还是PBS配比较好，加溶液的时候用准一点的枪好还是用注射器），还有母液浓度应该是多少比较好（我订购的是10g装的），谢谢
作者:
zerollx
时间:
2012-2-13 16:22
直接水溶，0.22过滤，母液避光，Vc的用量一般没那么精确，故2者均可，当然也得看你具体是什么实验了
作者:
白巧克力
时间:
2012-2-13 21:58
对。刚好我也想问这个问题，sigma的Vc A4544不是无菌试剂...
作者:
huangcong1988
时间:
2012-2-14 16:08
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zerollx
的帖子
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, k U! \! P$ M1 z: }$ Y
做ips，不知道浓度要求高不高，还有开盖前怎么使得Vc粉末掉到瓶底呢？谢谢
作者:
zerollx
时间:
2012-2-14 19:19
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huangcong1988
的帖子
" Q1 k8 _9 G" f* f
( M! s: B+ [, I
哦，裴端卿的那篇文章上说的终浓度好像是25~50ug吧，给的是一个范围值，所以要求不高的。我们买的Vc的25g的大包装，用多少就称多少配一下就好了！
作者:
huangcong1988
时间:
2012-2-14 21:35
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zerollx
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( A4 x! d9 ^# E, A
5 N7 o7 ^2 Q: k
用分装冻存吗？
作者:
白巧克力
时间:
2012-2-15 14:53
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zerollx
的帖子
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, Z# T& E2 A. W/ W; m/ g
你好，我想问下，您是怎么称量的？用分析天平称量无法避免支原体的，用0.22 μm filter过滤，也无法过滤支原体。我买的就是sigma的25g包装，由于这个问题考虑换医院出售的注射试剂。希望能得到您的解答。谢谢！
作者:
bio-bin
时间:
2012-2-15 15:17
我们一般是用无菌水配制成50mg/ml的母液，用EP管分装后，冻存在-20的，使用的终浓度50ug/ml。（避光）
作者:
huangcong1988
时间:
2012-2-15 15:31
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bio-bin
的帖子
5 D4 n2 G8 q, M! r% {! k
) t5 T3 t) a- G( ^- f0 j. s
那10g Vc该加200ml无菌水，那个小瓶应该装不了那么多水吧？能不能先加20ml水，然后再取出一部分稀释呢？因为瓶太小了，直接加水肯定加不了那么多
作者:
huangcong1988
时间:
2012-2-15 15:35
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白巧克力
的帖子
' `+ b7 A0 G V. T5 B+ M
' Q+ |1 M4 O- _: P9 [6 r5 h+ i, I
我觉得您这个问题比较好解决，您可以直接加水配成母液，然后在母液基础上再稀释，这样能避免支原体污染
作者:
bio-bin
时间:
2012-2-15 15:48
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huangcong1988
的帖子
) `% J9 R; F/ Y5 T% T' \# A& {
8 @; Q+ H+ ^! h8 L6 g r* Q. X, S
我们一般不会全配了的。一般是称量500mg后，加10ml无菌水，0.22um过滤后分装。
0 |1 H% b9 X, S5 W5 z
作者:
白巧克力
时间:
2012-2-15 15:58
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huangcong1988
的帖子
7 ?8 Y- |/ K; `; o
( \8 n) T9 E2 J: k
您的意思是，直接在25g的棕色瓶子里加水？不可能的，那能加多少水呢？关键是，Vc很容易氧化的，1g都会用好久，那都配成水溶液不都被氧化了。
8 B! {$ @4 E" s. X
本来这就不是个无菌试剂，更不会检测是否含有支原体。做ips最怕的就是支原体了。
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我不知道大家在外面称量后配制再过滤后给细胞有什么后果，我想着是不敢给ips的。
+ E9 h" |, o$ ~2 M A
本来我也是想配成母液的，用的时候稀释。也可能您的意思我没看懂吧，谢谢。
作者:
zerollx
时间:
2012-2-15 16:02
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白巧克力
的帖子
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我也曾经担心你所考虑的问题，我们一般是在细胞间称量，支原体污染的概率很小，实践证明是没有问题的，当然，你可以选择0.1um的滤器过滤，可以除去支原体的，不过那种滤器挺贵的。
作者:
huangcong1988
时间:
2012-2-16 09:07
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白巧克力
的帖子
: U2 \- Y3 M4 T* `% T6 Y
5 |) k, e/ `7 r& f: _5 C& G
您那个25g的棕色瓶不是很大，是吧？可能我考虑得不是很周全，我的意思是：如果瓶子不大的话，您可以先少加点水，然后再吸出部分稀释。我看论坛里面说Vc形式对了的话，保存还是比较容易的，不知道是不是您Vc形式对了吗
作者:
song58
时间:
2012-2-16 14:01
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huangcong1988
的帖子
7 ^' C/ t7 l/ p3 ?9 P
' S- p$ p5 O8 t G( B) @
离心
作者:
song58
时间:
2012-2-16 14:02
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huangcong1988
的帖子
% d* C0 l ]9 c1 S
+ ^9 v7 O; i$ N3 T
恩，我也是先在原瓶里稀释，然后再稀释...
作者:
huangcong1988
时间:
2012-2-16 21:31
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song58
的帖子
- X, ^& K7 x {6 c
2 I8 V/ \, \3 D0 p
怎么离心呢？10g装的瓶子比较大，没法离啊，还有原瓶稀释加多少水呢？配成浓度多少的母液？
作者:
linzi214
时间:
2012-2-16 22:05
易氧化的试剂建议最好不要全配了，取1g配成母液，分装后取一部分配成应用液。或者1g全配成应用液，分装后冻存。在台面上轻轻敲几次，把瓶盖的粉末可以敲下来，如果不是完全配掉的话，也可以不用太管盖子上的粉末。不知道瓶子有多大，不行的话可以放在15ml或50ml离心管里，进行离心。
作者:
song58
时间:
2012-2-17 14:39
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huangcong1988
的帖子
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不知道瓶子多大，也不知道你们那离心机多大，这个建议不好说
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以前我们实验室人多，Vc用量也大，所以一次会配很多，然后同学们领着用，不知道你们实验室什么情况，不过总能有合适的办法解决问题嘿嘿
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