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标题: 求教睾丸微注射实验 [打印本页]

作者: huozhicb 时间: 2012-2-16 11:21 标题: 求教睾丸微注射实验

小弟想做一下睾丸微注射，想向大家讨教一下：, ^( e' E% ], ]* H8 F4 w7 |5 m
我的目的是利用睾丸的微环境诱导干细胞向精子分化，要将细胞注入睾丸中。想请教一下专家以下问题：
1、注射针的参数具体是多少？
2、注射位点是哪？我看了一下网上的资料，有注射到曲精细管的，也有注射到输出小管的，具体哪些位置比较合适呢？5 ?3 m3 F$ R* R7 @/ r
3、我之前试了一下，感觉难度最大的就是将注射针插到曲精细管里，各位有什么诀窍吗？; ^$ i4 F4 q. E9 w, `0 u4 V
谢谢！: h0 r, ] o$ O, H
有相关资料的话，请不吝上传！

作者: sj03572001 时间: 2012-2-16 14:24

我之后的试验也会涉及到睾丸微注射，共同关注！

作者: yangpan521 时间: 2012-2-17 10:58

你好我的实验也是干细胞向精子分化，后期也要用到睾丸注射，我们可以交流一下

作者: yangpan521 时间: 2012-2-17 11:02

回复 huozhicb 的帖子
3 D7 ~. l) q9 y) o2 F: `
想知道你在诱导时，用病毒载体了吗？

作者: mansnoopy 时间: 2012-2-19 19:18

这项技术的平台构建我们是专门派人出去学的。。。所以。。。。。。

作者: yangpan521 时间: 2012-2-21 18:40

回复 mansnoopy 的帖子
3 m- K, b# o V/ Q
能传授点经验吗

作者: ying 时间: 2012-2-27 18:21

同行同行！' t7 z5 @+ f1 k% K2 R
最新的一个JOVE的视频，
http://www.jove.com/video/3545/germ-cell-transplantation-and-testis-tissue-xenografting-in-mice! }' H4 r- b8 i: K
不知你那里能看么？他还有一个PDF的文档。0 K: j" D% h4 G
我是上海的，最近正在做，虽然不熟练，但还是能注进去的，你要是有空咱们可以互相学习一下。
另外，Brinster实验室最经典的那篇注射的文章你有不？1997年那一篇，一作是ogawa（就是去年发琼脂糖气相培养睾丸组织出精子的那个人所在的实验室的通讯作者）。"transplantation of testis germinal cells into mouse seminiferous tubules"。里面挺详细的，似乎大部分相关文献最后都会引用到这一篇上。你那里要是不能下，我可以Email给你。

作者: 精神病院小蘑菇 时间: 2012-2-28 15:12

关注

作者: wangjuhua-123 时间: 2012-2-28 16:30

"transplantation of testis germinal cells into mouse seminiferous tubules"这篇文章到NCBI上直接下就可以。只是具体方法还得学，不是看看就能完成的。

作者: 精神病院小萝卜 时间: 2012-2-28 17:21

打输出小管的~[attach]39461[/attach]

作者: mansnoopy 时间: 2012-3-10 10:53

回复 huozhicb 的帖子

注射针需要你自己试试，一般问题不大。注射点肯定是先从输出小管进去到达睾丸网后进针！

作者: ying 时间: 2012-3-12 21:07

我打的时候总是只能有一半左右的曲精小管是蓝色，其余一半总是打不进去～诸位有能把整个睾丸都打蓝的么？有什么诀窍吗？

作者: 精神病院小蘑菇 时间: 2012-3-13 22:46

一般不需要打那么多量的细胞吧，你把整个睾丸都打蓝了，应该要打进很多的细胞悬液或者台盼蓝，而且，打进太多的液体对生精小管损伤也会比较大

作者: chenchunlei 时间: 2012-3-24 10:30

本帖最后由细胞海洋于 2013-9-5 10:06 编辑 0 D( ?3 Y' O4 t6 n' M# u x

我想问一下，正式试验的时候细胞还需要用染料染色吗？我知道目前是用台盼蓝，请问还有什么跟好的染料吗？

作者: huozhicb 时间: 2012-3-27 11:05

回复 yangpan521 的帖子
2 f3 W% W7 r7 E0 \; \/ y
我们不用外源基因诱导分化，利用培养液和环境诱导

作者: huozhicb 时间: 2012-3-27 11:15

本帖最后由细胞海洋于 2013-9-5 10:06 编辑 ; J6 T; P& b% g% q+ ]4 o7 n7 \

回复 ying 的帖子" F" Y8 B8 I% Q! R! O
1 @7 p! C, A6 V$ ?; ]# o2 e
谢谢啦！方便的话能把您的邮箱给我吗？邮箱联系方便点。

作者: blackbee 时间: 2012-4-20 14:13

本帖最后由细胞海洋于 2013-9-5 10:07 编辑 3 e' R2 }9 h( u W" N- P) b
9 W9 r! g5 f6 X
回复 ying 的帖子2 U- ?" q1 x6 y" a8 }7 b
9 n9 a( x# k& e3 O& z! }
你是上海那个地方的?我也在上海，我们也在做这个移植！！有空可以交流下！！

作者: wishhunter 时间: 2013-9-4 17:29

回复精神病院小萝卜的帖子

请问如何找到这个输出管啊，求教

作者: 精神病院小萝卜 时间: 2013-9-4 17:43

回复 wishhunter 的帖子
) L) g9 H( `1 t4 k, r
在睾丸动脉的上面一点点，有一个半透明的管子，跟脂肪的质地不太一样。

作者: 精神病院小萝卜 时间: 2013-9-4 17:43

回复 wishhunter 的帖子
6 w& b" R2 ~: }$ Y6 p8 C; S
在睾丸动脉的上面一点点，有一个半透明的管子，跟脂肪的质地不太一样。

作者: wateryong 时间: 2013-9-4 22:13

我也可能会用到这个.当初看到一个老教授教的时候,能找到小管,自己打就找不到了..还有我想请教一下注射的针的孔径多大啊?>

作者: wishhunter 时间: 2013-9-6 15:21

回复精神病院小萝卜的帖子- T8 [7 X& Z) y5 W2 k
7 B5 x0 C$ A' X, l3 W0 c
谢谢，是不是那个管子外围还有包着一层呢？有次注射的时候外面一层变蓝了，可就是进不了睾丸

作者: w343989328 时间: 2013-9-7 11:07

本帖最后由 w343989328 于 2013-9-7 11:09 编辑
) [! k3 S: T8 \
回复 wishhunter 的帖子 q/ w, j2 A* m0 x5 G
/ f+ Z" [, A; Y% |* \
找输出小管，说简单其实很简单，说难很难。我第一次找的时候花了20分钟。
首先记住一点，每只小鼠的输出小管颜色可能会有一些差别，甚至左右睾丸的输出小管都不一样。还有一点建议，不要去扯开那些脂肪，因为那样只会让输出小管和脂肪更加难以分辨。
输出小管的解剖学位置是固定的。睾丸的血管处于中间稍微靠近一侧，而这一侧边上有一层包膜连接这睾丸和附睾，输出小管就在这层包膜与血管之间约2/3处。记着它是从睾丸网出来走向附睾。但是注射的时候把小管周围的脂肪去掉还是比较有必要的，你很容易扎进脂肪堆里没有进入小管，就很出现你上面说的情况了。$ o7 z1 }: g7 v0 g5 k; w; V( s4 u
做到现在，一般把睾丸拉出来，我都能直接看到输出小管的。

作者: jhu132llh 时间: 2013-9-7 12:34

建议大家好好看看10楼的那张图片
10楼童鞋的图片海华丝很漂亮的
回答一下关于整个睾丸组织都蓝的问题
这个是基本不可能滴
除非高手高手高高手
基本上能打一大半就很不错了

作者: yourwish 时间: 2013-9-13 10:27

回复 jhu132llh 的帖子
2 W& T- R M' J! g9 k* { }
如何确定注射的台盼蓝在曲细精管，而不是在间质。因为曲细精管比间质占有的空间大，而图上恰恰相反。

作者: jhu132llh 时间: 2013-9-14 15:58

回复 yourwish 的帖子! Q8 ~# n, J* H3 w# _; a; k; x

这个就是看经验的. y. `! v% W/ K) m. s( c& h+ S9 Q
你先练练手直接把台盼蓝打在间质里然后查看台盼蓝的形态; `. }# Y5 z) E  K# Q
然后把台盼蓝打在曲细精管里% y: A6 J* P, ?/ |* A- k  l
然后查看情况
再把睾丸打开上显微镜下验证4 W( D( ?4 s; k- u/ E( S" a5 H. C% }
练上几次后就熟练了
这个实验看起来很容易，其实很难的6 A6 e4 W0 ]0 t7 [  g- G
不打上几十只小鼠的做不好的+ k4 W/ w" [; t: Y# B$ x8 I2 M
慢慢练吧少年

作者: wishhunter 时间: 2013-9-26 09:44

回复 w343989328 的帖子
1 y$ }9 t6 G! O/ `) M+ x1 p) l
请问下输出小管是不是还挺粗的呢？我现在注射ICR小鼠脂肪比较多，但找到管子后一般能注射进去，C57小鼠虽说脂肪较少，睾丸和附睾稍微拉扯一下就能看到一根管子，用镊子拨拨后好像也没脂肪包在外面了，比ICR小鼠的粗点，看上去比注射针头（40μm）粗个五六倍的样子，是不是还是没拨干净？从附睾那里到睾丸是逐渐变细的么？进针后一般都注射不进，除非一直扎到睾丸网里去了，不过这时候管子已经被我扎得千疮百孔了(>_<)

作者: w343989328 时间: 2013-9-26 14:22

回复 wishhunter 的帖子

我没做过ICR的，没有对比过大小。
有可能是因为没有拨干净打到管外，但也有可能是睾丸网和输出小管那里有什么结构阻碍到了。我进针的位点要是离睾丸网太远也打不进去。一般就5mm，一进针就开始慢慢打，沿着管向睾丸网的方向靠近。期间针头可以适当进退。慢慢练吧~) q4 r5 I2 o0 z- q, g& X
另，40um的针头不会太小了？( x6 y5 w0 e+ ^, x; p6 n6 y

作者: wishhunter 时间: 2013-9-27 10:01

回复 w343989328 的帖子

我看文献好像是40到70左右的样子吧？。。。下次我拍张照片请您帮忙看看，看是不是找对了

作者: 奋斗的时光 时间: 2013-12-10 11:04

难度似乎很大，后期也会遇到，同求回复！

作者: 奋斗的时光 时间: 2013-12-10 11:12

这图的确很牛。

作者: zijunqin 时间: 2013-12-11 00:40

回复奋斗的时光的帖子
1 ]; e1 @* n) Q
5dpp尝试过比较困难 10天以上成功率90% 表示要多练习你就能实现

作者: qiupubin 时间: 2014-3-11 11:54

这个，弄不好就把睾丸打爆了！

作者: w343989328 时间: 2014-3-13 14:36

回复 zijunqin 的帖子

你能注射进10d小鼠的睾丸吗？需要显微操作设备不？

作者: zijunqin 时间: 2014-3-14 08:25

回复 w343989328 的帖子
( t$ p4 W3 g: v9 T+ H, q1 r# b
10天的比较熟练 5天的成功率低些普通体视镜就可以了

作者: w343989328 时间: 2014-3-14 23:54

回复 zijunqin 的帖子% C( c4 M" ]$ D8 O; ~4 O

请问你是从那个部位注射进去的？曲细精管、睾丸网还是输出小管？c-kit mutant的mice还是WT的？

作者: zijunqin 时间: 2014-3-19 05:58

回复 w343989328 的帖子* N4 b. ~" Y$ s) N* r

进针是由睾丸网，WT和nude mice 都打过多打就熟练了

作者: zijunqin 时间: 2014-5-15 01:42

回复 w343989328 的帖子
8 U+ D" r; q4 L: }
不知道为什么不能加你好友你就留言吧就是有时差可能不能及时回复你

作者: w343989328 时间: 2014-5-15 11:04

回复 zijunqin 的帖子( E2 a3 p, f$ o1 I9 M$ g

我想问下，10d小鼠注射的话，是用冷冻麻醉吗？解剖时是剪个纵口，缝合前要让睾丸归位吗？我们移植的不是SSC，我担心移植进去的细胞竞争不过内源性SSC，不知道选择pup作为受体合不合适，有老师说可以在母鼠怀孕时注射白消安，但我没找到文章，不知道可不可行、

作者: zijunqin 时间: 2014-5-16 07:44

回复 w343989328 的帖子
( S7 ~9 L8 _# W! K
10d 使用avetin 0.4ml/25g 麻醉可以，5D建议冷冻麻醉；解剖横切和纵口我都试过，都可以，建议纵口；缝合后睾丸归位，pup?很高端啊！我没做过；孕鼠注射白消安需要摸浓度，过高造成流产，我已试过30mg/kg,流产，建议降低浓度尝试

作者: w343989328 时间: 2014-5-16 21:59

回复 zijunqin 的帖子8 n2 E8 _: n$ M% j

呃，我说的pup是指10d的小鼠。。应该没错吧。。。谢谢你，我先去尝试过再来讨教

作者: zijunqin 时间: 2014-5-17 01:44

回复 w343989328 的帖子

pup 是小狗吧

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