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标题: ES培养基的成分及配制 [打印本页]
作者: huangcong1988    时间: 2012-2-29 21:52     标题: ES培养基的成分及配制

最近准备配human ES 培养基，但是看了文献之后觉得头大了，因为不同文献使用的配方很大不同，所以想请教各位战友，human ES的培养基的成分，配制需要注意哪些事项，有没有使用起来很好的human ES培养基？谢谢大家
作者: zhusealin    时间: 2012-3-1 07:54

我们用的配方是 80% DMEM/F12   20% SR    1% NEAA    0.5% 谷氨酰胺  4ng/ml bFGF   0.1mM beta巯基乙醇
作者: lixf    时间: 2012-3-1 08:33

我们用的配方是 79% KODMEM   20% SR    1% NEAA    1% 谷氨酰胺  8ng/ml bFGF   0.1mM β-巯基乙醇
作者: song58    时间: 2012-3-1 11:02

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  c7 f: B3 |6 ]% u8 h$ h: B0 K( e: U* G+ c; c; t( n: s. a
KSR                                              Invitrogen        100 ml
( Y. _& J% A- C8 Z0 xNon-Essential Amino Acids              TMS-001-C         5 ml
6 \% u. Z; k1 a. S2 D5 HL-Glutamine Solution               TMS-002-C         5 ml
2 k) E! z  t+ i8 J; ?; lBeta 2-Mercaptoethanol               ES-007-E        5 ml: q2 C( i8 D4 w1 F5 E1 R/ h" h" [
Penicillin-Streptomycin (optional )    TMS-AB2-C         5 ml
0 F9 m/ W8 V0 V. F" ~Fibroblast Growth Factor basic,
1 N1 T9 x  ~/ ^: B; f# t human recombinant              GF003        4 ng/ml
: y- v3 G/ n  o2 Y5 L7 mEmbryoMax® DMEM/F12              DF-042-B        Add to 500ml
$ P9 r) a# h- v) ?8 ~# d- f/ n* A2 g& s3 h6 ]* t
我用的配方，仅供参考
8 A0 S% D% H* q0 B) w" T
作者: huangcong1988    时间: 2012-3-1 11:25

回复 zhusealin 的帖子
0 d" v( b9 k/ [7 D+ h( }1 U2 C
5 }+ |5 v' ^! W谢谢，我看大家配方中主要是FGF含量不同，这个影响大么？
作者: huangcong1988    时间: 2012-3-1 11:27

回复 song58 的帖子
$ o0 D0 J8 S# h# F( a9 i3 Y, A/ z" o( \
谢谢，那这些成分分别怎么保存呢？
作者: huangcong1988    时间: 2012-3-1 11:28

回复 lixf 的帖子3 w& M/ C  M) Z$ L

1 @$ A8 H! R/ g8 b0 f谢谢，那β-巯基乙醇用过滤么？它会溶解滤器么?它是有机溶剂?
作者: huangcong1988    时间: 2012-3-1 11:37

回复 song58 的帖子
& Q2 Z$ v% r4 B# B* i1 J; b# \1 z' r/ m0 o0 E5 m( B
还有，问你一个问题，就是之前丝裂霉素c加PBS配了之后，颜色是淡紫色，这个正常吗？
作者: song58    时间: 2012-3-1 13:56

回复 huangcong1988 的帖子, y; a; ]; X! k4 v( Q) C0 P

5 |/ _1 M0 O* l& C4 B保存的话，每个产品包装上都有注明。, Y2 j& t; B4 b2 M" b. h  D
MC应该是不用PBS溶解吧，我用培养基（10%FBS的DMEM）溶，这东西需要避光保存，新鲜配的发点紫红色，比DMEM颜色深点
作者: lixf    时间: 2012-3-1 17:12

回复 huangcong1988 的帖子1 k# y8 d8 ?3 t: i7 m' @- W

; b. i- e5 W( W( C; g稀释、过滤，我们过滤的时候也没见它溶解滤器呀。是有机溶剂
作者: zhusealin    时间: 2012-3-2 08:11

bFGF 用量4-10ng/ml都可以
作者: huangcong1988    时间: 2012-3-2 09:49

回复 zhusealin 的帖子
$ n$ {, V' q9 q! G! ?
0 m6 v" l$ O. f  E9 d) Q谢谢，那请问您购买这些试剂的公司和货号能否告知呢？因为现在这些试剂很多公司有卖的，但是品质差异很大，第一次配ES培养基，所以恐怕买到不合适的
作者: huangcong1988    时间: 2012-3-2 09:50

回复 song58 的帖子  V0 A# V, A) Z  B, {8 r; ^6 I

# O# G8 N( X* @) T- D能否告知购买这些成分的公司和货号呢？它们品种太多了，我都没法鉴别品质跟真伪，谢谢
作者: huangcong1988    时间: 2012-3-2 09:52

回复 lixf 的帖子) v+ P% \: j+ J# f& N" A3 N

, k. W) e, ~! l$ _9 ]& x: w7 T谢谢，你们购买这些成分一般是用哪个公司的，哪个货号呢？
作者: song58    时间: 2012-3-2 12:51

回复 huangcong1988 的帖子. n' s. e" G/ v/ I: A5 x. T
& _8 q$ `" t6 `5 `) B' m- |: c9 b
有些是invitrogen的，有些是Millipore的
作者: zhusealin    时间: 2012-3-3 10:05

bFGF用的preprotech的，beta巯基乙醇用的sigma的，培养基是invitrogen的
作者: huangcong1988    时间: 2012-3-3 21:21

回复 zhusealin 的帖子3 E2 _* U- v) K4 |8 i  h
, g7 o  L# M. q7 {
货号呢？这些试剂很多种啊，但是不知道哪种适合于细胞培养，或者说ES培养，所以想问问您各种试剂的货号，谢谢
作者: huangcong1988    时间: 2012-3-3 21:22

回复 song58 的帖子: v; S' ~, I( A8 m$ c* N/ e

& t7 h) T4 ~0 _8 ^3 d能否告知各产品的公司和货号呢？谢谢
作者: zhusealin    时间: 2012-3-4 08:27

DMEM/F12 GIBCO 11330
3 P3 S: e: F( B# g2 xSR   GIBCO 10828
; Z( l' Q4 {5 U, ~! xNEAA   GIBCO   11140
1 A% M) B; f4 v1 k3 \- u" \L-Glutamin  GIBCO    25030
$ v, |+ l7 r1 i9 s+ @beta-mercaptoethaol  SIGMA   M7522
5 M& {9 {# j; VbFGF     invitrogen    13256-029
作者: huangcong1988    时间: 2012-3-4 10:13

回复 zhusealin 的帖子, U! L% i1 g4 v
' i( F, e# k! ?1 A: ^! f
非常感谢！



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