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标题: 请教干细胞成骨成脂染色及染色方法 [打印本页]

作者: wuyannini 时间: 2012-3-1 19:34 标题: 请教干细胞成骨成脂染色及染色方法

本帖最后由 wuyannini 于 2012-3-1 19:37 编辑 ( S3 s2 W$ |2 W

我在做干细胞的成骨、成脂分化鉴定。查了网上关于成骨成脂的染色及染色液的配制，但有出入。谁做过这样的实验，并且比较成功，能否提供染色液的配制方法及染色方法？谢谢啦 g; u: L0 H- ~7 {& Z9 J! W
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另外补充：请不要从网上粘贴过来，需要的是已经做过并成功的方法。拜托啦！

作者: zerollx 时间: 2012-3-1 22:36

本帖最后由 zerollx 于 2012-3-1 22:41 编辑 " K1 e  |7 v5 h' j5 g
$ G! S# Q! D6 k! `
回复 wuyannini 的帖子8 q/ `" h+ T4 Y

成脂：/ b% B3 L* o) H4 x  x; [* i
油红-O染料：3 ]9 v. J+ s; g$ R; X& `
   储液：0.7g油红-O溶解在200ml的异丙醇中，0.2um滤器过滤（除去沉淀），室温储存。
   工作液：配成上述浓度60%的浓度，即加30ml储液，20ml蒸馏水，混匀，室温放置30min，若有眼见的沉淀物，可再次过滤，24h内使用。
染色：
固定：弃去培养基，DPBS洗涤2遍，4%多聚甲醛固定10min，弃去固定液，DPBS洗涤3遍（此步后可在4度保存半个月）3 A" r  ^% h6 e7 W
      六孔板中每孔加2ml油红-O染料，室温孵育20~60min。
脱色：用2ml DPBS洗涤直至背景色干净，注意一定要洗干净（不要加太多的DPBS洗涤，否则会将染料浮起得更高将皿壁也染上），有效的洗完之后，加入2ml的DPBS,倒置显微镜下观察。

作者: zerollx 时间: 2012-3-1 22:39

回复 wuyannini 的帖子8 L/ B: U3 |! l2 P$ o. J- J

成骨：" T6 z" {( i; x" I3 L( k! C
（1）染液配制：
1g的茜素红S溶解于100ml的蒸馏水中，用0.1M的NaOH调节pH至4.1–4.3 ,0.2mM滤膜过滤，室温避光保存" }% [0 P( g8 s6 s. J- a
（2）染色& s& K& b1 I7 J e6 Y* B: E
1、弃去培养基，用DPBS洗涤3遍
2. 4%多聚甲醛室温至少固定15min。
3. 1%茜素红染液固定10min。
4. DPBS洗涤细胞，以尽量去除残余的染液。3 T& V7 }' x9 ^
5、加入DPBS，拍照。

作者: 573639471 时间: 2012-3-2 18:14

学习了

作者: wuyannini 时间: 2012-3-3 09:44

非常感谢

作者: wuyannini 时间: 2012-3-5 11:46

回复 zerollx 的帖子3 N( x b- R1 ?( M. I8 e& _' T
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茜素红的配置怎么是1%的啊？我查了好多都是0.1%的，到底哪个浓度的准确啊？

作者: zerollx 时间: 2012-3-6 20:48

回复 wuyannini 的帖子+ H% M- z4 Z `4 c. k+ `! v
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我用的是1%的，我曾经尝试过0.1%，在同样的时间内是染不出来的，也许延长染色时间可以，但我没有尝试过！

作者: wuyannini 时间: 2012-3-6 21:20

回复 zerollx 的帖子' m. ~( [/ z3 ^: y# z

我先用1%的茜素红试了一下，孵育完毕后，染液好多去除不掉，影响照相，最后还是选择用的0.1%的。谢谢啦

作者: 沙漠狐o0 时间: 2012-6-4 12:58

请教下,为什么我做的成骨分化实验,细胞在16天左右密度过大不贴壁了,会漂浮在培养基中...?

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