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标题: 请教！我用无血清培养基养的胃癌原代细胞，为什么会出现这种小颗粒？ [打印本页]

作者: 暮色英雄 时间: 2012-3-6 12:36 标题: 请教！我用无血清培养基养的胃癌原代细胞，为什么会出现这种小颗粒？

本帖最后由暮色英雄于 2012-3-6 12:42 编辑
4 F& W" V7 b7 }+ v
我是用无血清NB培养基+EGF+bFGF+B27+p/s双抗的培养基培养的胃癌原代细胞，培养基已经用0.22μm过滤器过滤除菌，但是培养细胞之后出现很多小颗粒，不知道是什么东西，这照片是昨天照的，今天再观察的时候这些小颗粒已经长满了，我师姐帮我看了说是污染，然后我把细胞倒掉了，但是她也不知道这是什么污染。希望各位大侠能帮小弟看看这到底是不是污染，是什么东西？谢谢了* s5 W- F/ n6 l+ D8 o+ Q
这是20x镜拍的

' a; S. A8 D+ Y6 G

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http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=Mzk2OTl8N2ZmNThkZmN8MTc5MzQ2OTEyNnww

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作者: l19rna 时间: 2012-3-6 12:55

Yeast？

作者: houbara 时间: 2012-3-6 13:21

yeast

作者: 暮色英雄 时间: 2012-3-6 13:21

如果是yeast，该怎么去掉？

作者: biotly 时间: 2012-3-6 13:30

要是真长了，直接扔掉，重新养一盘吧，想要去掉污染物是吃力不讨好的事情。另外好好检查一下污染源在哪里，有真菌污染可不是闹着玩的，yest污染也是挺恐怖的事情，特别是培养箱要消一下毒。

作者: 细胞海洋 时间: 2012-3-7 01:36

回复暮色英雄的帖子

询问谁请点击对方回复帖子中的回复按钮然后输入内容像我这样否则他会看不到你的问题

作者: 暮色英雄 时间: 2012-3-7 11:02

回复 biotly 的帖子- w5 Y/ |* H9 F$ Q
' z: E. W& M* J d! j( d
一般酵母的来源可能是什么呢？我这是原代细胞，会不会是从病人身上带来的？

作者: holywater 时间: 2012-3-7 12:36

这哪儿是酵母，是念珠菌，很常见的实验室污染。

如果不是很珍贵，坚决扔掉
* J" z8 Q8 w8 r3 o
如果很珍贵，试试一些抗真菌抗生素

作者: 暮色英雄 时间: 2012-3-7 13:08

回复 holywater 的帖子2 }/ j) k: ~* q0 O

啊，念珠菌？能不能高速我一般是用什么药物来处理呢？

作者: evial 时间: 2012-3-7 13:18

大多是因为原代肿瘤细胞，粘膜上带有很多细菌，你没有冲洗干净就养了，十有八九会长菌。组织快要冲干净在消化了养！加抗生素只能抑菌不能杀菌，否则细胞也要死的。

作者: 暮色英雄 时间: 2012-3-7 13:26

回复 evial 的帖子1 {% W6 j5 d5 p# A5 C$ S6 V

冲洗？我是取一个6cm的培养皿，在里面加入PBS，然后将肿瘤组织放在里面浸泡，然后再换一个装有PBS的培养皿浸泡组织，这样是不是不行啊？

作者: holywater 时间: 2012-3-7 15:19

试试如果肿瘤块没有那么小，短暂浸一下医用酒精

作者: laurel101 时间: 2012-3-7 16:53

回复暮色英雄的帖子

PBS里最好也加P/S双抗。

作者: 暮色英雄 时间: 2012-3-7 19:31

回复 holywater 的帖子$ X; Y5 R# y% n f

是胶质瘤，脑袋里面取出来的，很脆弱

作者: evial 时间: 2012-3-7 20:25

看了上面的回答我真是要吐血了！是不是没有上过医学院？
人体组织怎么可以用酒精泡！！！你的伤口用酒精擦擦看看什么感觉？酒精会损伤组织的还怎么样细胞？而且只是一般消毒起不到灭菌作用，别以为实验使用的酒精就是灵丹妙药！
这样浸泡根本不足以去除细菌，你想一碗面上漂的油，把面捞出来放在另一个汤碗里上面还有漂油么？还是有的啦，也就是说人胃里粘膜上有很多细菌，这在整个消化道都是生理性的正常的，但是对培养细胞不利，细菌也不会因为泡PBS就死了。唯一方法就是用流动水冲洗！别不舍得PBS，提着组织用针筒吸了PBS冲5分钟，基本可以将细菌概率降到最低。

作者: evial 时间: 2012-3-7 20:27

看了上面的回答我真是要吐血了！是不是没有上过医学院？
人体组织怎么可以用酒精泡！！！你的伤口用酒精擦擦看看什么感觉？酒精会损伤组织的还怎么样细胞？而且只是一般消毒起不到灭菌作用，别以为实验使用的酒精就是灵丹妙药！" H, _# l/ Q# g$ _* t& f8 A }
这样浸泡根本不足以去除细菌，你想一碗面上漂的油，把面捞出来放在另一个汤碗里上面还有漂油么？还是有的啦，也就是说人胃里粘膜上有很多细菌，这在整个消化道都是生理性的正常的，但是对培养细胞不利，细菌也不会因为泡PBS就死了。唯一方法就是用流动水冲洗！别不舍得PBS，提着组织用针筒吸了PBS冲5分钟，基本可以将细菌概率降到最低。

作者: evial 时间: 2012-3-7 20:28

你不是说胃癌么？怎么又变成胶质瘤了？脑子里出来的绝对无菌，把血冲洗掉就可以了。脑子里出来还有细菌病人要得脑膜炎了

作者: holywater 时间: 2012-3-8 12:42

本帖最后由 holywater 于 2012-3-8 12:46 编辑
9 P1 F- u3 ? k
回复 evial 的帖子9 M, i3 T4 j3 E' t+ P% V

0 f# u: R7 u9 y( Q% N( m8 D( |* x! Y
看了上面的回答我才要吐血呢，你不看题目，就莫名批评人，怎么能做好实验5 {. n; f4 B, g6 h7 l4 r

楼主是肿瘤细胞原代培养，不是要给人手术缝合！题都没审好就乱叫。
7 n6 r# v( ]; l. W% S- [4 v' x
组织培养用些表面消毒剂很正常。PBS冲洗，你洗多少次也是降低污染概率而不是除掉污染9 v! W, t9 v, x6 e: ^

你有没有学过组织培养啊，酒精是表面消毒剂，如果肿瘤块不是那么小，酒精浸泡个半分钟一点事情都没有。我原代培养时候经常泡酒精消毒老鼠
+ I( L$ v# i0 y8 U
植物组织培养还用氯化汞消毒呢，你怎么不批评一下？

作者: holywater 时间: 2012-3-8 12:51

为什么我到哪儿都遇到这种人，题目都不看好就乱反对别人的？还你有没有做过手术，我没做过手术但是我做过200次的神经元原代培养！
2 T$ l! m- V. F$ P1 _- o7 y# J3 o
论手术，我可能只会用菜刀切猪肉，但是论原代培养，那你就像婴儿画画。

作者: evial 时间: 2012-3-8 13:39

脑组织是无菌的，只要注意无菌操作应该是不会污染的，而胃黏膜是有菌的。小鼠可以酒精浸泡一下再取骨髓。你试过在培养基里面加点酒精或者其他消毒液看看细胞会不会死？
这和审题有关么？你写的内容已经给大家看到了么，你写了标题没有啊，大家都没看到你有标题么！
那本老外写的protocal我们一起看看吧，那里写着用来培养的组织块可以用酒精或其他消毒液泡？. I m( }. U* s9 H+ b% M: M) J% B
我是外科的，酒精在消毒剂中不是最强的。培养房的表面消毒我们用次氯酸钠消毒片做的水擦洗，连肝炎病毒都可以杀死，你要不试试用来泡组织？
干细胞之家是交流学术的场地，不是小朋友吵架的。做科研和做人都要踏踏实实！

作者: holywater 时间: 2012-3-8 19:37

楼主是问培养，某人说什么手术的请一边去，跑题还有理了。不和你玩了，说实在的，我看到某些人帖子写的非常可笑，我都懒的理--现在省事了。3 l' g" y+ e4 m6 h, t

说实在的我回帖子是看得起你，但是你就这样子，算啦。今后除了有美女请教我，我才不去纠正别人错误呢～～

作者: 细胞海洋 时间: 2012-3-8 23:04

大家围绕学术问题互相交流不要互相指责大家的出发点都是好的不要因为观点不同而互相攻击。

两位朋友握握手没必要这样的
* }+ @# u, w# @* R \& t( T

作者: evial 时间: 2012-3-9 12:47

本帖最后由细胞海洋于 2012-3-9 22:15 编辑
4 k* |/ \3 {6 c& x
我一直在想组织用酒精浸泡的事，从科学角度看问题么，越辩越明是好事。酒精可以是蛋白质瞬间凝固，肝癌有的可以用酒精灌注就是利用组织坏死的原理杀死部分癌细胞，但用的是无水酒精还有脱水作用。但在细胞坏死时释放各种坏死因子，我没做过调研，外面的细胞浸泡酒精坏死了会不会对里面的组织产生影响，逐而影响实验结果？

作者: 暮色英雄 时间: 2012-3-9 13:36

回复 evial 的帖子! Q& ]' Y- ?! e( f

我在培养两种原代，胃癌和胶质瘤的，都是遇到这种问题。两天前我单独把培养基倒出来培养，并且把加了EGF和bFGF的培养基也单独倒出来培养，今天发现，加了EGF和bFGF的培养基的这盘里面长满了小圆球，而且还在动，估计是EGF和bFGF污染了，不是来自肿瘤组织

作者: 暮色英雄 时间: 2012-3-9 13:38

回复 holywater 的帖子

额，我的肿瘤组织是来源于医院，我们跟医院合作的，他们切下肿瘤，然后我过去拿。顺便说一下，他们切下肿瘤的时候是放在保存液里面4度保存的（DMEM：FBS：DMSO=7:2:1），不知道这个组织冻存液配方有没有问题。从切下肿瘤到我拿回实验室，中间大概有5个小时

作者: evial 时间: 2012-3-9 21:04

外科主刀在切下肿瘤后要快速放入培养基里面，有时他们不知道你要做什么实验，因为有的试验不做细胞培养不用无菌操作对待，那么他或者护士可能放在不是无菌的地方，手术台上盘子是无菌的，但是周围其他东西是有菌的，如果碰过那么脑瘤也会染菌。你要告诉他们你的目的，外科医生都会懂得，无菌操作是外科基本常识。
为什么要用DMSO呢？你那里看来这种方法？那是用来冻存细胞的，用来稳定细胞不要被冰晶涨破，多少对细胞有点不好。所以你要是直接提细胞的就放在一般培养基里面带到实验室好了，时间短的话平衡液、生理盐水都可以的。医用静脉级别的平衡液、生理盐水要比PBS好，人静脉都能用没有致热源更没有细菌，所以你可以去医院搞一点来。比你买PBS又便宜又安全。

作者: evial 时间: 2012-3-9 21:06

还有就是你的操作没注意无菌要求，或者细胞房不是很干净了

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