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标题: 请问丝裂霉素C如何保存 [打印本页]

作者: ying 时间: 2012-3-9 17:11 标题: 请问丝裂霉素C如何保存

请问一下诸位大侠，丝裂霉素C溶解之后该如何保存？
我在各种来源的protocol上看到的，说溶了之后可以4度保存一个月，但如果有沉淀析出则扔掉。后来又有同学告诉我，可以放在-20避光放很久很久，拿出来还可以用。挺想如此做但又不敢贸然如此，所以想请教一下诸位。; E9 x' ]% Z; j- P! X; w
还有，就是1个10cm碟子要加多少毫升的10ug/mL的MMC？用一次之后可以回收重复使用多少次？
做MEF用10%还是15%FBS?要不要灭活？加丙酮酸钠和不加有何差别？要加glutamin吗？$ ?7 E( S. \- Y2 o

求高手解答之谢谢

作者: xiaoqi 时间: 2012-3-9 17:52

-20度避光保存，长期存放的话最好加点BSA。另外，你配制的丝裂霉素C应该是母液吧，假如说10cm皿需要加4ml的培养液的话，则需要根据你母液的浓度算出需要添加多少母液才能达到10ug/ml。就是一个C1*V1=C2*V2公式的运用。

作者: lingminliang 时间: 2012-3-9 20:33

-20℃避光可以长期保存，一般母液是配成1mg/ml，一个10cm的培养皿加3.5ml或者是4ml培养基，那么加母液应该是35或者40μl。用完一次之后直接弃掉，不重复利用。做MEF用10%FBS，我们做的是不灭活。丙酮酸钠应该是提供碳源的，要加glutamin。

作者: mansnoopy 时间: 2012-3-9 21:51

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母液有紫色结晶是会出现这个现象的，没有问题。母液一般负20保存，工作液4度即可，注意避光，防污染

作者: zhusealin 时间: 2012-3-10 07:57

我们做MEF用的是不灭活的10%FBS，基础培养基如果已经含有丙酮酸钠和谷氨酰胺了，可以不加

作者: 573639471 时间: 2012-3-10 13:06

我是配成500μg/ml母液分装，浅浅的蓝色，-20保存，久了会有黑色沉淀不影响使用的。用时稀释到工作浓度10μg/ml，使用量个人感觉覆盖过细胞就可以，T25的瓶子我用过2ml 3ml 5ml 差别不大。
FBS10%，不灭活，另加glutamine和非必须氨基酸

作者: sarah19860420 时间: 2012-4-13 22:44

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我的分好的50ug/ml的MMC在4°放了不知道多久的时间，是呈现淡淡的紫色，对吗？* H* S2 O8 i0 Q
另外有的人说PBS洗5遍后，在消化等他铺到单层，再接种细胞，到底是什么样的顺序，搞不懂了。是不是可以直接洗后就直接接种细胞啊？

作者: 573639471 时间: 2012-4-15 13:07

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淡淡紫色没有什么问题，但是如果一直放在4度，久了恐怕会失效的/ ]0 N, \- z- d) V9 p6 o( E, H

灭活后可以直接种，但是尽量洗干净，我的方法PBS洗5遍后，加入培养液放半小时或过夜，直接接种了

作者: jkfly 时间: 2012-4-18 21:58

母液一般-20摄氏度保存一年可以，工作液4摄氏度可靠保存1个月，我三个月的也用过，可以的，我觉得问题不大

作者: YYQ6301 时间: 2012-5-2 14:13

我们一般都是4度避光保存，时间不要太长，问题不大

作者: huangcong1988 时间: 2012-5-2 14:59

我的MMC也是配成母液后放了快一个月，后来用了一次，感觉效果也还行，没影响2 b- f' E2 W2 r6 e
但是后来我还是分装了，冻负20里面，然后加锡纸避光* m: m; ^6 {+ s1 U+ T! S+ a- x7 `
之后冻着的MMC析出了紫黑色的结晶，感觉其实也没有影响，但是你在用之前，一定要把整个结晶融完，直至完全透明（还是呈淡紫色），才能用，不然这个紫黑色的结晶会使得大量细胞死亡（它就像炒菜的时候，菜里面的一坨盐巴）
加入MMC母液的量要视你培养基的量和母液浓度而定，终浓度是10μg每ml，处理2.5h1 R& q3 }1 m z' f% Q, ~
处理后可以用PBS洗了之后直接用，但是也可以先消化下来铺了再用，有的做得比较精细，消化下来后计数，然后再铺，这样比较好一点，因为直接用的话，可能细胞密度太大了，那么饲养层密度太大不是太好
养MEF直接10%的FBS就行了，而且不需要灭火，用高糖培养基就行了，没有注意具体成分（个人觉得丙酮酸钠和glutamin的影响不大），DMEM（gibco）就行了

作者: SKC-SFC 时间: 2012-5-2 15:45

10cm培养皿培养基应该加入10mL左右吧

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