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标题: HUC-MSCs细胞培养状态怎么控制？ [打印本页]
作者: wangsandan0503    时间: 2012-3-13 09:38     标题: HUC-MSCs细胞培养状态怎么控制？

刚开始培养hUC-MSCs细胞，什么时候换液，是2天还是3天，师兄教诲说是2天换液，自我感觉如果2天换液的话，细胞状态不太好，3天换液细胞生长比较旺盛。可是我的细胞状态一直这样，不知道是好，还是坏？大家看一下[attach]39915[/attach][attach]39915[/attach][attach]39914[/attach][attach]39914[/attach]! \+ ]) G, |0 o& h
细胞培养基里面总是有很多黑渣子。师兄说是细胞碎片，请各位指导。
: E1 H, {- I0 z2 X细胞传代的时候消化细胞的时候，离心速度时间应该是多少比较合适？总觉得自己的细胞传代之后状态很烂。  hUC-MSCs细胞是在10cmdish里面培养好呢  还是细胞培养瓶中好点 ？
作者: sj842563    时间: 2012-3-13 10:28

和我培养的很想，我感觉是消化的问题，有没有老前辈给解释一下啊
作者: 一一    时间: 2012-3-13 12:12

可能有很多因素造成，但是结果一致，细胞不健康，所谓黑渣渣，就是细胞里的颗粒，是判断状态的一个形态指标，如颗粒度多，胞膜不清晰。胰酶，营养度，毒性都可能是原因，但是消化过度，细胞会黏连，打不散，而营养如能源，碳源，助于细胞贴壁，保持形态的因子等，不够或不稳定也可能是原因，有些具有细胞毒性的试剂，需要注意。但是具体什么原因，还需要你做实验，改变单一条件，比较找出原因，不同批次是否有差别，这都要通过反复实验。
作者: pailishi    时间: 2012-3-13 16:31

这个细胞状态很差了，0.05%胰酶消化2-3min，在10cmdish里面培养也可以很好，还有你的培养体系是什么呢？
作者: wangsandan0503    时间: 2012-3-13 17:28

回复 pailishi 的帖子2 v5 D" w  l; h9 q0 ?

8 A* Y7 S6 `. S) q' x  i培养体系  我也不知道是什么  是德国进口的   具体什么也不清楚
作者: 金戈    时间: 2012-3-13 21:09

1. 培养瓶也好 培养皿也好 都不是主要问题，二者都没有影响的。
9 }) S( g5 m: A) I5 N2.换液一般3天就可以了。2天也不至于会生长不好。只是有些浪费血清和劳力。8 [6 C7 g, s6 r) N0 S
3.从你的第一张照片看 是有漂浮不少死细胞，因而很可能是你传代过程中消化没控制好。& J( u% A6 t% M$ l0 P( @' |) V* ~
你没讲具体怎么操作也不好评价。注意一些细节就好。胰酶处理久了对细胞不好。
作者: wind789    时间: 2012-3-14 08:41

wangsandan0503 发表于 2012-3-13 09:38 & p9 }7 Z% o& }
刚开始培养hUC-MSCs细胞，什么时候换液，是2天还是3天，师兄教诲说是2天换液，自我感觉如果2天换液的话，细 ...

- l0 h, D, g- ^* f5 N5 V第一张是贴壁第二天？第二张是贴壁第四天，满得过度了？" b+ m$ W$ h, o; [# ]
和我用DMEM+FBS培养的状态很像。
作者: wind789    时间: 2012-3-14 09:38

wind789 发表于 2012-3-14 08:41
& ~& e# D1 b, Z; e" S% V' @; x第一张是贴壁第二天？第二张是贴壁第四天，满得过度了？7 f" G/ f, \4 H& \, o5 J- L
和我用DMEM+FBS培养的状态很像。

* B$ A3 ?0 y8 D% A+ \6 ?" v想附上实验图2张，不知如何上传。望提示！
作者: 上帝帮我转运吧    时间: 2012-3-14 11:53

回复 wind789 的帖子: J+ v: {7 Q; O2 p

# w2 _4 N/ {/ g) a) i- V. r采用高级模式    附件上传就可以了
作者: wangsandan0503    时间: 2012-3-14 16:03

本帖最后由 wangsandan0503 于 2012-3-14 16:06 编辑 ! p" E' i- _, {) j& i& r5 K

; F! o+ j7 N( H/ x9 M回复 wind789 的帖子
1 @* A5 u0 S2 {" G# k' M* A: P! K( q
对  你说的很对  和我的一样。您的联系方式？
作者: wangsandan0503    时间: 2012-3-14 16:05

回复 金戈 的帖子1 D' b/ p, a) ~2 p2 i# U
2 l; f/ W1 J7 k5 i$ f3 f0 w( e" A
你说出了我的心声，谢谢大牛。
作者: wuyannini    时间: 2012-3-14 19:37

1、刚开始培养细胞最好是间隔2天再给细胞换液，我的经验是这样。
2 H7 N- K; x' Y* M5 j  H/ f, p2、细胞传代，消化过了，或者消化不够而机械损伤比较大，会影响传代
6 \# P( @8 a6 O7 g: t8 _3、细胞的接种密度，也会影响细胞的生长，不要过稀。
0 K# J5 t: w  E' F- Y4、离心速度时间我一般是用1000rpm，效果还可以。
% n" ^" `1 a6 T. Y5、细胞生长状态跟是用培养皿还是细胞培养瓶没有关系% |9 p) x0 ~5 P. B
6、至于说细胞培养基里面总是有很多黑渣子，我的实验中还真没这么明显，具体原因俺不清楚。
作者: 448922239    时间: 2012-3-14 20:24

MSC一般3到4天可以长的比较密了。楼主的这种情况以前也遇到过，可能是胰酶消化的时候没控制好时间，也可能是培养液的问题或者细胞自身的问题，建议楼主做个对比试验看看。。。
作者: Tim    时间: 2012-3-14 20:43

你的HUC是人的吗？？？细胞黑点你可以多洗几次！但要注意吹打的力度！不然会弄坏细胞的！胰酶消化注意掌握好胰酶的消化细胞的程度！一般肉眼可以看到培养瓶底变白时！立马吸出胰酶！等2MIN左右轻轻拍打瓶底！细胞开始脱落就可加终止液停止消化啦！切记吹打细胞力度要适度！动作要轻！
作者: wangsandan0503    时间: 2012-3-14 21:19

回复 Tim 的帖子4 o5 f1 v4 J: Y* g: a: M, ~4 r, w# `

7 N" Y! n; }* [/ L% `1 P1 v您的回答矛盾啊   
作者: wangsandan0503    时间: 2012-3-14 21:21

回复 wuyannini 的帖子
# p( C" a8 P2 B
4 w  {8 W; x7 R, d( \% v您的回答基本解除我的困惑   谢谢多多交流   我是天医的   希望和您成为朋友。邮箱wasonthinking@163.com
作者: Tim    时间: 2012-3-14 21:46

回复 wangsandan0503 的帖子$ T0 |. c+ S8 l3 w5 X( }
7 \" ^: y: e: b
哪里有呢！？？？？
1 q! N4 H" t% ?. K
作者: Tim    时间: 2012-3-14 22:25

本帖最后由 Tim 于 2012-3-14 22:29 编辑 5 A* G; H  R+ w; z

4 q0 N2 u! |  Q' ]" x8 w# U回复 wangsandan0503 的帖子就是HUC是人的吗！？你那是我的小疏忽！对不起！！！你可以把它去掉！我这边改不了了！
作者: wind789    时间: 2012-3-15 12:17

本帖最后由 wind789 于 2012-3-15 12:20 编辑
4 K% g/ i9 k, s+ u$ u
2 o, x6 @4 M% O: y# X# M0 I[attach]39981[/attach][attach]39980[/attach]6 `% ~1 x& V+ G4 H; r  V4 y
同一来源细胞，有血清和无血清培养对照。
2 Q& H6 P) K2 ]- x! O所以楼主，看看是不是培养体系的问题？
作者: sj842563    时间: 2012-3-15 13:29

wind789 发表于 2012-3-15 12:17
3 r/ m  W4 v; G同一来源细胞，有血清和无血清培养对照。
$ x+ d1 s  n2 R. `; ~: h) X所以楼主，看看是不是培养体系的问题？

% q, I: m2 e; P请问你用的是什么无血清培养基4 V/ q7 D2 _2 T/ U" A
作者: wangsandan0503    时间: 2012-3-15 23:36

回复 wind789 的帖子
* }' t3 O* v% k( \! {- Q9 ]
+ ~7 D' A% S4 Y/ a' n) A# m& x您好，请问您说的上面细胞状态特别好的那张，无血清对吗？
作者: wangsandan0503    时间: 2012-3-15 23:37

回复 Tim 的帖子
6 c$ M* @2 V' F7 K" t
# p8 e8 P4 W' @/ e/ o+ d呵呵 没事没事 我也是犯过那个毛病  后来被师兄纠正了。  所以显摆一下   嘿嘿
作者: wind789    时间: 2012-3-16 08:03

wangsandan0503 发表于 2012-3-15 23:36
2 m1 z7 s1 S- }回复 wind789 的帖子
0 ]8 G) ?7 A, a3 F$ F% l
& i- o" t& y  S- i  H( h" ?1 @您好，请问您说的上面细胞状态特别好的那张，无血清对吗？

/ z: c$ a' I' \/ L  j  D4 }上面一张是无血清，下面一张是DMEM+FBS。
$ S: d9 C% Y; y) k: K" q+ {7 ?& k
作者: levell    时间: 2012-3-16 10:52

    不知道这是培养第几代的细胞，细胞老化很严重，其实第几天换液不是死的，要看细胞的状态，建议你可以试试半量换液，有些细胞很依赖环境，频繁的全部换液会让它不适应。7 n" V3 ~+ d9 F9 _. V/ L
    再一个如果你的细胞是代次靠前，养成这样就要考虑你原代获得的细胞就不好
作者: wangsandan0503    时间: 2012-3-16 20:34

回复 levell 的帖子9 x8 U/ _: O' W1 s+ Y; \- ]
. R" r/ T) ?0 E# H
可能细胞有点老化，谢谢。



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