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标题: 细胞老化的问题 [打印本页]

作者: yanlu98 时间: 2012-3-19 15:30 标题: 细胞老化的问题

本帖最后由 yanlu98 于 2012-3-19 15:36 编辑

我养的脐带间充干细胞是用酶消化法处理的，现在养到第二代，就有的出现了老化的现象，细胞出现了好多小黑点，还成菊花样生长，一簇一簇的，培养基倒出后肉眼就可以看到皿底有很多小点点，就是镜下看到的小簇细胞，而且这些小簇等到消化的时候在镜下看也会回缩，我感觉还是细胞，等到传到新的皿后，不久又出现了。细胞不是很多时也会出现，如果细胞长得多了，消化时细胞就会像一层白膜一样脱落下来，而且很难吹开。我用的培养基是GIBCO的DMEM,血清也是GIBCO的优级FBS（澳洲源），我现在养的方法是以前师姐用的方法，FBS加2%，但是我看很多文献都是4%，会不会是血清的问题呢？但是我以前养的也没有出现这样的情况啊，希望大家能帮我分析一下！谢谢！

作者: wangsandan0503 时间: 2012-3-19 15:41

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我也出现同样的问题啊。小黑点，应该是细胞碎片。不用在意，上次咨询老师，老师说可能是污染，然后我让他在显微镜下看了一下他说正常，你可以上传你的细胞照片，共同分析一下。

作者: yanlu98 时间: 2012-3-19 16:45

回复 wangsandan0503 的帖子: i( t& k# Q2 r

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就像这样，周围的细胞也不是特别密，就形成簇状了，郁闷！你的也是这样吗？

作者: hanbing 时间: 2012-3-19 16:57

看你这细胞的状态还算可以啦，这个细胞就是越长越大，越来越宽，我样的细胞就没超过p20

作者: receiver1 时间: 2012-3-19 17:12

应该不是血清的问题，血清少了的话，造成血清饥饿，细胞状态会不好。显然你的细胞状态还行。我也遇到过这种情况。我怀疑细胞不纯，杂细胞产生了某种因子导致细胞聚集。重新做一次吧

作者: cneagle66 时间: 2012-3-19 17:15

感觉细胞传代的时候没有分散成单细胞，这样的话，其他地方稀稀落落，而有细胞的地方已经成团。

作者: hwlightning 时间: 2012-3-19 17:49

1、细胞密度没处理好，其它地方细胞少，成片状的细胞太多，没有混匀。1 F0 J0 s s9 l3 x: @7 P) s* _' b
2、细胞养的时间太长，细胞太密集了。: Y9 }: c ]3 y

作者: cactus006 时间: 2012-3-19 22:43

回复 yanlu98 的帖子, x" I6 G" {. k
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看样子是细胞没有及时传代，然后聚集成团；消化的时候整个细胞球没有消化开，接种到新的培养瓶中就会成簇生长，建议接种密度稍微低一些，接种时吹打成单细胞悬液试试

作者: wind789 时间: 2012-3-20 08:20

本帖最后由 wind789 于 2012-3-20 08:21 编辑 ' n2 f, R) p5 ?( F

yanlu98 发表于 2012-3-19 16:45 / H) z" H/ v/ r1 S
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感觉是消化时细胞成片成白膜下来，没有吹散就接种了。你细胞的状态还可以啊。

作者: 喇叭shopping 时间: 2012-3-20 08:31

消化传代吧，细胞太密会使细胞老化加快。建议接种时细胞吹散，低密度接种。

作者: lingminliang 时间: 2012-3-20 08:47

有可能是你酶消化时间过长了，细胞成团粘连，你吹的时候又没充分吹散，所以才会造成细胞分布不均

作者: 上帝帮我转运吧 时间: 2012-3-20 08:59

我的也是这个问题* D2 j" V* m- k6 L: K) i& _- x
http://www.stemcell8.cn/forum.ph ... mp;page=1#pid599398不是吹散的问题，那些小点点会慢慢变多，求经验呢！

作者: wangsandan0503 时间: 2012-3-21 11:30

本帖最后由 wangsandan0503 于 2012-3-21 11:32 编辑
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细胞传代的时候没有吹打匀，而且细胞铺的不均匀。

作者: hello2134 时间: 2012-3-21 11:45

细胞接种的时候不均匀，建议吹打均匀后再种板，另外传代比例可以1传3或1传4，就不会出现这种想象了。同时，注意及时传代，3-4天传一代，传代晚了的话也会出现上面情况。

作者: Demon_CN 时间: 2012-3-23 12:12

没加贴壁因子吧，细胞光长不往走遍爬了吧。

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