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标题: 请教一个问题为什么基因打靶要用雄性ES细胞系 [打印本页]

作者: 懵懂干细胞 时间: 2012-3-19 22:02 标题: 请教一个问题为什么基因打靶要用雄性ES细胞系

麻烦那位高手能解释一下吗？) M! ~! u/ k; `
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谢谢了

作者: 懵懂干细胞 时间: 2012-3-19 22:32

我想到的只有两点，一个是可以对Y染色体进行敲除；另一个是可以避免由失活的X染色体甲基化状态改变等带来的负面影响。

作者: sarah19860420 时间: 2012-3-20 03:28

选择雄性的ES细胞系，只需要敲除一次就可以得到纯的KNOCK OUT 的细胞。而雌性的是有2个X染色体，即使敲除一个，也还是杂合体，我是这样认为的

作者: xiaojunhu1985 时间: 2012-3-20 08:50

这种回答应该都有问题。其根本原因一、由于雄性ES细胞，遗传特性稳定，二、外源基因一旦整合到基因组，进入生殖系，公鼠交配可以重复利用，在下一代中更容易得到敲除小鼠，。

作者: 懵懂干细胞 时间: 2012-3-20 08:55

回复 sarah19860420 的帖子1 H5 j" S& y6 j
; i! g( v' K% T
当敲除的是X染色体上的基因才符合这种情况，但一般都不是敲除X染色体上的基因的，敲X染色体上的话还要进一步讨论

作者: 懵懂干细胞 时间: 2012-3-20 09:01

回复 xiaojunhu1985 的帖子
( `8 _) s& Q2 _& Z+ a
雄性ES细胞为什么遗传特性稳定啊？雌雄不可以重复利用？

作者: lifeida 时间: 2012-3-20 09:20

用雄性的主要是后代好交配，获得纯合个体，如小鼠上敲除了公鼠的a-半乳糖苷酶，通过杂交、回交就可以较快的获得纯合体。

作者: sarah19860420 时间: 2012-3-20 22:01

回复懵懂干细胞的帖子, D: n6 e+ r( W. }. h- ?. y8 p3 N
9 j+ n4 k1 @ Z( N- R; _
恩，是的

作者: jefferson 时间: 2012-3-28 14:31

本帖最后由 jefferson 于 2012-3-28 14:32 编辑

请问LZ这本是什么书？" ~- o7 B. ?/ G9 W- q$ e
' l- V7 o3 {' j8 D
来源雌性的ES细胞系，在某些方面确实比来源雄性的不稳定些。) o% t+ Z# G5 X: Y' A1 E+ h

在遗传稳定性上，有报道说ES细胞在长期培养过程中发生的获得性变异多发生在12, 17和X染色体上；  h2 S( [- a7 _* u. {! q  G- Z
在表观遗传稳定性上，来自雌性的ES细胞在X染色体失活方面有着不同的差异，有报道在一些来自女性的ES细胞系中，没有观察到X染色体的失活。从这点上来说，来自雌性的ES细胞，表观遗传稳定性还是有差异的。
0 C0 ?* A& |9 q$ l# m
因此虽然一般的基因打靶不会靶入到性染色体上，但相比雄性来源ES细胞系，雌性相比而言确实稳定性稍差。
5 m& m/ Y; r; m  o( n
不过这几年，做干细胞打靶的研究越来越多，但从没看到过说只能打雄性干细胞的说法。大概搜了几篇PAPER, 都用到了女性的ES做的打靶。+ U4 E& ^% d* k" K

1. Gene targeting of a disease-related gene in human induced pluripotent stem and embryonic stem cells. Cell Stem Cell. 2009 Jul 2;5(1):97-110. Epub 2009 Jun 18. 用的是H1 (Male) 和H9 （Female）细胞；. |* U! r( U3 G% M8 p% ?
2. Generation of platform human embryonic stem cell lines that allow efficient targeting at a predetermined genomic location. Stem Cells Dev. 2009 Dec;18(10):1459-72. 用的是H9 （Female）细胞；2 L5 X5 o; I6 y0 v
3. Highly efficient transient gene expression and gene targeting in primate embryonic stem cells with helper-dependent adenoviral vectors. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008 September 16; 105(37): 13781–13786. 用的是KhES-1（Female）和KhES-3(Male)细胞。8 b8 o* U/ E/ e: y# i9 ^  I

因此，个人觉得，LZ书上的这个说法，是否有问题？

作者: ying 时间: 2012-3-28 14:57

前几天听了个讲座，貌似确实有此一说。他的解释我忘记了～那个讲座是个中国的做敲除的公司的技术人员，应该讲的靠谱吧。

作者: cicadacjk 时间: 2012-3-31 22:04

这个太容易解释了，你自己想象一下操作过程就知道6 X6 @8 _6 Z5 F! t. G, j
敲除的限制步骤是germline transmission8 p) }1 q( U$ w1 y, n. ?$ j
说到底，这就是茶壶和茶杯的关系

作者: wlj0912 时间: 2012-8-17 14:51

回复懵懂干细胞的帖子( ?4 D% d* p/ H. e
% I3 D; U1 ?& W: \8 [/ f
雄性的小鼠一旦出现嵌合鼠了，可以和很多母鼠交配，F1代比较容易出现

作者: qizhi502 时间: 2012-8-17 18:53

因为那个时代转基因动物的出生所使用的是嵌合的办法，嵌合动物的出生雄性概率和存活率都很高，但是克隆和四倍体嵌合技术较为完善的话，也可用xx的细胞系

作者: colindream 时间: 2012-12-17 14:40

刚开始接触干细胞，对 germline transmission 实在是不太理解。 7 J& P! Q( X9 M
我现在刚开始做 gene targetting,,现在筛选 ES 阳性克隆。

germline transmission 的理解，实在是没有概念，。，。 a/ @( Z7 y4 n7 P
望大侠指教！！！

作者: colindream 时间: 2012-12-17 14:41

回复 cicadacjk 的帖子6 u! m5 ?; ]; T+ W2 i& c# ]+ g

刚开始接触干细胞，对 germline transmission 实在是不太理解。
我现在刚开始做 gene targetting,,现在筛选 ES 阳性克隆。
) t2 @/ i0 @4 v' k% H+ F m
germline transmission 的理解，实在是没有概念，。，。
望大侠指教！！！

作者: 细胞海洋 时间: 2012-12-18 11:25

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作者: usepray 时间: 2013-7-3 10:59

长期以来做基因打靶一直接在小鼠等动物水平,而打靶效率很不一致,很少情况下能得到一个等位基因打靶的细胞系,所以通常的做法是将一个等位基因打靶的细胞系(ES)培育成小鼠,然后将其与正常(通常带有重组酶)异性交配,有1/4概率得到两个等位基因打靶的纯合子后代; 如果起始用的一个等位基因打靶的细胞系(ES)是母的,一次交配只能产生一窝;如果是公的,你想想可以多少窝,这样可以保证拿到或拿到更多纯合子,这就是germline transmission./ Z4 A+ p! k' h' l0 y
但是随着打靶技术的发展,在人等高等动物细胞水平也可以实现打靶后, 伦理上你不能培养克隆人,不存在利用germline transmission产生纯合子的可能性;所以用XY的XX的(如果不存在什么易于同源重组的说法,这个还真不了解)都一样了,可以看到文献中有用H1也有用H9或其它人的ES细胞系.

作者: concentrate123 时间: 2013-7-3 11:14

应用雄性的比较好吧，建系成功如果想对y染色体进行基因修饰，用雌性岂不是不能处理？

作者: qq007www 时间: 2013-7-24 15:37

还是看你打靶的基因在哪吧，但好像说雄性细胞基因稳定遗传性较好

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