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标题: CIK 细胞图片 [打印本页]

作者: 冠忠 时间: 2012-3-20 01:27 标题: CIK 细胞图片

新手一名，麻烦各位师兄，可以给我一些意见。1 K" N0 t4 {! r$ v. u2 G
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我想问一下，如果要换液，请问是用离心方法好，还是直接加一半新的液好?
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谢谢
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作者: wind789 时间: 2012-3-20 08:36

直接加新的试试。

作者: lingminliang 时间: 2012-3-20 08:38

直接加也比较好，好多文献上都是这么做的

作者: zb_ming 时间: 2012-3-20 08:51

你可以根据具体情况：1、如果细胞培养天数不多，如2-3天，且培养液未达到瓶口（容易污染的地方），可以采取半量换液，也就是加新的液体进去。2、如果培养天数较多，到了该传代的时间，那就要离心传代全量换液了。3、根据细胞生长情况，对数生长期的细胞建议半量换液，过了这个时期就要传代全换了。一定要自己多观察，总结经验，多试验。以往的文献仅供参考，不可全部照搬照抄啊。摸索出来适合自己的的就是最好的。学无止境，实验也用无定论，哈哈，仅供参考。

作者: zb_ming 时间: 2012-3-20 08:56

你的图片看过了，也只是一个视野里面的细胞，第一张图看细胞球（大的和小的）比例基本各占一半，应该不算“老化”，应该半量换液就可以，但具体情况还要靠自己去观察，去摸索。只有自己才能看到最全面最真实的情况，别人的（包括我的），仅供参考，祝顺利！

作者: 大少爷 时间: 2012-3-20 10:14

半量换

作者: 肉丁 时间: 2012-3-20 10:40

这个最好还是要看细胞的状态吧，如果你觉得碎片比较多，你就可以全量换一下，如果碎片不多，可以考虑半量换液，个人意见哈

作者: nek314 时间: 2012-3-20 13:40

我觉得不用换，直接加新液就行。你在培养瓶还是袋里？

作者: 冠忠 时间: 2012-3-21 00:31

谢谢各位师兄的意见!!

我还有几个问题想问一下:

1. 我在文献中看到，很多时候都是说可以增值200-300倍，我想了解是CIK细胞数目增加，还是其他单核细胞都会增加?
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2. 在图中，有一团团的黑色东西是什么来?要弄散吗?
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3. 在文献中，有些说换液时有加Anti-CD3，有需要补充吗?

4. 可不可以在显微镜下看培养皿决定要不要换液?- R' i' s x6 G3 A) ~

5. 我在培养的时间，过了好几天，培养液都没有变色，我应该根据3-4天换液，还是等待培养液变色?# X6 B! [7 W" U1 |3 P; W# ?/ K
5 i" k8 f) b, Y5 v# h F8 f
谢谢

作者: 细胞海洋 时间: 2012-3-21 00:56

本帖最后由细胞海洋于 2012-3-21 00:57 编辑
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回复冠忠的帖子! p8 d" o! G" H6 Q+ l7 d2 v

建议你发新帖提问回复中提问看到的人不多

作者: NK细胞 时间: 2012-3-21 10:56

回复冠忠的帖子! ~) L( {" g) m$ c- p" L6 Y
J! H. `7 W, Q5 o
1.细胞数量都会增加，但CIK细胞数量所占比例也会增加，具体增加多少需要做流式检测。
2.可能是一些细胞团吧，能弄散最好弄散，一般好像补液或换液后会自动分散开。
3.我看的文献上有说加IL-2的，你可以试验一下加不加有区别没。
4.这个当然可以，不过最好不要被染菌了
5.你可以在显微镜下看看，细胞浓度大的话，可以换啊，，小的话就算了，别浪费。6 n3 V4 m& B" F8 b9 Q
以上仅供参考。

作者: daitao 时间: 2012-3-21 16:05

回复冠忠的帖子
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从你的图片来看，黑色团不是细胞是培养瓶盖子上掉下去的一些黑色朔料！你的细胞碎片很多，可以收集处理！加新的培养液！以后达到密度后半量液传代就行！最后在细胞对数生长期一天一传得到目标量的细胞！

作者: lunyuyuanxj 时间: 2012-3-21 16:49

看细胞密度，还可以再长。如果现在半量换液细胞密度可能会比较低，不利于生长。

作者: 冠忠 时间: 2012-3-22 01:08

谢谢各位师兄赐教，小弟获益良多。

我想再了解:, G' @- I1 j$ j/ ~* u

1. 我知道培养细胞之浓度最好是1x10^6/mL，我是用血球计数器(hemocytometer)去数细胞，但是大家都知道，细胞数量可以很大，请问是否要稀释好几倍先可以数细胞?0 I  y2 I3 z+ Z0 j4 @5 W: k7 `3 p0 J
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2. 我想问一下，过了几天后，细胞增值速度是多少?:一天一倍?还是几天一倍?+ b' i& [  N% [7 F( A

3. 有关细胞碎片，请问是否用离心换液就可以处理好?为什么会有那么多细胞碎片?可以预防吗?  ^2 j* U+ o7 p# C

4. 请问CIK妯胞在浸在PBS环境里，室温，可以存活多久?: g) ?9 S: k1 D0 _

谢谢大家

作者: 细胞海洋 时间: 2012-3-22 22:46

回复冠忠的帖子# D- j: p) S$ q* ~" q8 k
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作者: 上帝帮我转运吧 时间: 2012-3-24 10:37

我看着像细胞结团了

作者: realinter 时间: 2012-3-29 16:48

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1. 用CD3单抗和IL-2刺激是以扩增CIK细胞为主，但是T细胞也会增多。
2. 是克隆团，长的特别大的时候要吹打一下，防止里面细胞生长的不好。
3. 实验证明不需要
4. 一般是3天直接补液进去，关键还是看颜色是否变黄，密度是否大。6 @! T, h# [$ H

作者: tanyu08 时间: 2012-8-20 11:12

黑色的团块是淋巴细胞增殖的团块的，并不是所谓的什么掉下去的塑料，这是好现象，团块都上浮的时候可以吹散，让DC作用到更多的淋巴细胞，长成CIK。

作者: 莫邪小仙 时间: 2012-8-20 12:48

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1. 我们是用的血液分析仪计数的，用计数板的话我觉得应该稀释后再计数。2 y! y5 j; D4 h9 e
2. 我们养的CIK是两天翻一倍。* A% w* \5 a0 N; I) o
3. 细胞碎片的存在是正常现象，只是操作好的话会少些。在换液时我们进行对比过，离心会对细胞造成损伤，从而增加细胞碎片的量。因此换液时不再离心。6 X0 H) y; z/ D7 f
4. 这个问题我也不知道，没做过，期待高人指点。

作者: 蓝O海 时间: 2012-8-22 09:53

1.关于数目的增加，所有的单核细胞都会增殖200-300倍，: } G0 K/ |9 c
2.图中的黑色球状无为细胞碎片的聚集物，离心换液后会消失的。你上面的那张图我自己觉的应啊做个半量离心换液最好。
3.显微镜下观察细胞的生长状态，密度，培养基中细胞碎片的多少来决定是否需要换液、传代。5 m% N9 g! t% Z
4.我建议每4-5天半量换液一次（除非细胞非常的少，但也需要补充因子。）。也需要补充因子。

作者: aiping802300 时间: 2013-12-20 16:40

本帖最后由 aiping802300 于 2013-12-20 16:41 编辑

你好，我也在养CIK细胞，我的形态和你的不太一样，大家是这样的吗
[attach]57868[/attach]有圆的也有变形的

作者: 细胞海洋 时间: 2013-12-23 11:49

回复 aiping802300 的帖子: p! G8 @9 A7 V; U/ R

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作者: 筱筠 时间: 2014-2-11 10:17

补加新的培养液

作者: chslyx 时间: 2014-2-13 11:41

离心换液还要考虑会损失的的细胞，你的图上好像是细胞团，个人建议加液就可以了

作者: wf78365421 时间: 2014-2-16 13:02

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直接加等量的培养基。
半量换液优于全量。

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