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标题: 急求神经球荧光方案 [打印本页]

作者: changbo529 时间: 2012-3-21 22:36 标题: 急求神经球荧光方案

神经干细胞贴壁培养后72小时视野中出现如图细胞，请问这是少突% N2 n# G2 W0 E" l% ?- q
胶质细胞吗？还有一个问题就是悬浮培养的神经球怎样做免疫荧光和计数？急求

作者: changbo529 时间: 2012-3-21 22:43

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该图是少突胶质细胞吗？

作者: aifei001 时间: 2012-3-24 10:42

请教楼主，神经干细胞怎样贴壁培养？换培养基还是换别的条件，我们想让神经干细胞贴壁，总也不贴。谢谢

作者: changbo529 时间: 2012-3-24 23:58

我用的是多聚赖氨酸包被，但一贴就分化，但我又不想让它分化，所以我现在也很无语

作者: changbo529 时间: 2012-3-24 23:58

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我用的是多聚赖氨酸包被，但一贴就分化，但我又不想让它分化，所以我现在也很无语

作者: aifei001 时间: 2012-3-25 20:16

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谢谢。我也一样无语啊，看来还是文献看的少。希望问题都能克服！

作者: jessewill 时间: 2012-3-27 01:00

回复 aifei001 的帖子, x( P$ F# Z4 J1 S
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我觉得是你的细胞状态不行了吧，也就是说你悬浮培养的神经球已经出现了一定的分化，因此贴壁之后，你就很快看到了神经干细胞的分化。. l( \' x+ _% R, E# ~6 [, `
如果保持着多能型的干细胞，即使贴壁也是不会分化的。, I: V# i# J* q/ ?) |( J* ?
所以还是从培养NSC的条件上去考虑。

作者: jessewill 时间: 2012-3-27 01:00

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我觉得是你的细胞状态不行了吧，也就是说你悬浮培养的神经球已经出现了一定的分化，因此贴壁之后，你就很快看到了神经干细胞的分化。/ H" h- f/ E1 x3 _, P* Y$ F
如果保持着多能型的干细胞，即使贴壁也是不会分化的。
所以还是从培养NSC的条件上去考虑。

作者: jojomayer 时间: 2013-3-26 16:21

jessewill 发表于 2012-3-26 18:00
3 v1 _+ d/ `9 Q* Y0 K回复 aifei001 的帖子
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我觉得是你的细胞状态不行了吧，也就是说你悬浮培养的神经球已经出现了一定的分化， ...

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请问一下你是如何通过镜下观察判断细胞有没有分化的？
楼主图中的细胞是什么细胞？如果细胞没有分化，镜下应该是什么样子？与分化的有什么不同？
谢谢！

作者: justin03 时间: 2013-3-27 14:48

感觉楼主的图不是神经干细胞了，悬浮培养神经干细胞一般会成球的，贴壁培养的话也会成球的，细胞有短突触，不会像图片那么明显的突起的。会不会是取材或传代的过程中有接触到FBS，让细胞分化了？

作者: mayiwaiwai 时间: 2013-5-22 14:51

本帖最后由 mayiwaiwai 于 2013-5-22 14:52 编辑

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有没有未染色的照片可以放一张呢，我也遇到同样的问题呢，贴壁做增殖是什么样子？

作者: ss安雅熙 时间: 2014-4-15 16:38

如果原代是悬浮培养的话离心弃掉培养液加入PBS洗两遍以后放入PLL包被的培养板里然后就加入神经干细胞培养液贴壁6小时后即可行免疫荧光这样细胞不会分化还能保持干细胞形态注意做染色的时候洗的时候要小心千万不要脱片

作者: ss安雅熙 时间: 2014-4-16 08:30

悬浮培养的细胞离心加NSC培养液重悬以后放入PLL的培养板里贴壁6小时以后行免疫荧光（时间久了容易分化）做的时候小心清洗防止脱片

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