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标题: 求助，hiPS诱导EB逐渐消散! [打印本页]

作者: ligangtiancai 时间: 2012-3-25 14:58 标题: 求助，hiPS诱导EB逐渐消散!

如题，我的hiPS在悬浮诱导EB后开始逐渐从边缘脱落，3天后基本上就全散开了，很是郁闷。。

问题如下：( v- L  Y. N9 ]9 w
   1 EB逐渐脱落散开的原因？. j' o4 ]; e* B' c4 L2 X6 _
   2 如果是支原体污染，如何检测和去除？) V# z' w* H) K: G) q
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               谢谢！

作者: bio-bin 时间: 2012-3-26 12:45

回复 ligangtiancai 的帖子# o& C4 |2 v' Y+ G: H
& W# p% q" `% d
我也遇到同样的问题。我想请教一下，你用的EB培养液是什么?（DMEM/F12+20%K-SR+1%NEAA+1%Glu+2mM βME? 还是不用k-SR，加血清？)，另外你的hIPS形成EB前是维持在有饲养层上，还是在matrigel上？

作者: ligangtiancai 时间: 2012-3-26 18:16

回复 bio-bin 的帖子: J2 K% A2 R4 Y0 H. v
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做EB时用的是MEF的培养基，高糖DMEM80%（PAA）+FBS（PAA）+1%NEAA+1%L-Glu。EB是悬浮培养的，接种前去除MEF

作者: jefferson 时间: 2012-3-27 14:31

建议换二楼说的培养基试下，不过用FBS替换KSR，即DMEM/F12+20%FBS+1%NEAA+1%Glu+2mM βME，也就是EB20培基。7 k* W4 `" n* Q2 p3 J. h
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另外，如果有支原体污染，直接丢吧，基本没办法去除的。即便加药，效果也不好。

作者: ligangtiancai 时间: 2012-3-27 22:29

回复 jefferson 的帖子

恩，我试下，请问你用的FBS是什么牌子的，是否是ES-qualified的？谢谢

作者: jefferson 时间: 2012-3-28 09:14

回复 ligangtiancai 的帖子% B3 B% O4 |! r: z; a

GIBCO

作者: echoxy1020 时间: 2016-8-9 05:05

回复 jefferson 的帖子/ F# o- U. N) {+ N4 X% H# ]0 E7 d
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请问一下为什么建议用FBS替换KSR？有什么区别吗？

作者: wangxiang 时间: 2016-8-9 08:52

支原体检测可以用PCR的方法，清楚推荐sigma的BM-CYCLIN。如果不是重要细胞，建议就直接扔掉吧，杀的周期较长。

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