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求助，hiPS诱导EB逐渐消散!
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作者:
ligangtiancai
时间:
2012-3-25 14:58
标题:
求助，hiPS诱导EB逐渐消散!
如题，我的hiPS在悬浮诱导EB后开始逐渐从边缘脱落，3天后基本上就全散开了，很是郁闷。。
8 s4 p* |8 E7 ~! m _
8 R, E: J+ A" [7 C3 H# d7 z
问题如下：
& e8 }: Q, `8 b
1 EB逐渐脱落散开的原因？
( W7 X; {# V2 W5 P/ L
2 如果是支原体污染，如何检测和去除？
: B/ m# k4 ]6 k" u0 p* b4 |
8 \4 R. z+ O8 [6 ^3 [
谢谢！
作者:
bio-bin
时间:
2012-3-26 12:45
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ligangtiancai
的帖子
9 N! u/ A, U& O- \3 K/ v; B
2 g/ Z) Q; v9 U: y% W: k
我也遇到同样的问题。我想请教一下，你用的EB培养液是什么?（DMEM/F12+20%K-SR+1%NEAA+1%Glu+2mM βME? 还是不用k-SR，加血清？)，另外你的hIPS形成EB前是维持在有饲养层上，还是在matrigel上？
作者:
ligangtiancai
时间:
2012-3-26 18:16
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bio-bin
的帖子
6 A- T1 q. B$ l# v4 ~' A$ w$ h8 U( W$ \
$ p3 X' ^8 C/ B$ a+ k
做EB时用的是MEF的培养基， 高糖DMEM80%（PAA）+FBS（PAA）+1%NEAA+1%L-Glu。EB是悬浮培养的，接种前去除MEF
作者:
jefferson
时间:
2012-3-27 14:31
建议换二楼说的培养基试下，不过用FBS替换KSR，即DMEM/F12+20%FBS+1%NEAA+1%Glu+2mM βME，也就是EB20培基。
0 h' Z" K/ f3 u# f: E# ^2 p: @4 r
) Z* M0 Q# F5 B! Y9 F, E# Q4 l
另外，如果有支原体污染，直接丢吧，基本没办法去除的。即便加药，效果也不好。
作者:
ligangtiancai
时间:
2012-3-27 22:29
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jefferson
的帖子
9 ?! M( i4 k, o/ J
% C9 `$ i X8 N! Z+ ` N
恩，我试下，请问你用的FBS是什么牌子的，是否是ES-qualified的？谢谢
作者:
jefferson
时间:
2012-3-28 09:14
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ligangtiancai
的帖子
& A" g7 q+ H) Z
/ G; R: Z: A2 ~- @& y9 _
GIBCO
作者:
echoxy1020
时间:
2016-8-9 05:05
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jefferson
的帖子
% A3 J* `0 k: M' H* h; s% R8 n2 v4 \
2 X5 R( w( M) E: \# E! v6 H3 J
请问一下为什么建议用FBS替换KSR？有什么区别吗？
作者:
wangxiang
时间:
2016-8-9 08:52
支原体检测可以用PCR的方法，清楚推荐sigma的BM-CYCLIN。如果不是重要细胞，建议就直接扔掉吧，杀的周期较长。
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