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标题: 脐带间充质干细胞培养基的配置？ [打印本页]
作者: wangsandan0503    时间: 2012-4-9 19:17     标题: 脐带间充质干细胞培养基的配置？

大家都分享一下自己的脐带间充质干细胞的培养基是怎么配置的？防止分化的效果如何？
作者: wangling0607    时间: 2012-4-9 21:19

我的是最普通的培养体系，DMEM（LG),FBS,双抗，L-谷氨酰胺
作者: seall    时间: 2012-4-10 07:22

我们用的是a-MEM加10%FBS，加双抗。
作者: 漂泊的风    时间: 2012-4-10 08:25

我用的是a-MEM加10%FBS，没有双抗。效果也挺好的
作者: Demon_CN    时间: 2012-4-10 09:32

L-DMEM+10%FBS我以前经常用来做实验的，培养出来性状稳定、形态正常。长的速度还可以，我是用组织块贴壁做的，大概20天左右能传P2代。) y# f+ V% Z4 U# t) @9 O2 ~( e
有些资料写加L-谷氨酰胺什么的，我认为没有必要血清的营养成分很丰富。加了有点浪费了。
' q  Q2 F, }6 l1 s' t/ F怕污染的话可以加点双抗，但对细胞会有影响。
4 A: i% l# Z& P# A# e0 W可以从实验流程上来减免污染。
作者: wangsandan0503    时间: 2012-4-12 09:38

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2 u/ K$ I' Z3 n# x1 I  [
4 e" A, I0 h1 J6 p, S1 D4 w您用的就是成纤维细胞的培养基   这样的话 脐带间充质干细胞分化情况如何。
作者: wangsandan0503    时间: 2012-4-12 09:39

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7 I) Z5 H9 ]: z: @; I" i
, W8 P$ v1 f$ m5 pLG-DMEM里面本身就有谷氨酰胺 为什么还要额外加呢？
作者: Demon_CN    时间: 2012-4-12 10:33

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# m! d& Y* s5 Y. o5 [, J- p0 C  L
5 y' ]$ Y3 f3 K0 y7 v- ?8 b4 {. y) ^我订的都不含有的，, y3 p  x0 }. ~. {
所以要的话要自己加，量也可以调节
作者: yingjie    时间: 2012-4-13 08:34

加谷氨酰胺是很有必要的，一般培养基里面是含有谷氨酰胺，但时间长了谷氨酰胺是会降解掉的，特别是配成完全培养液后，所以很有必要在配液时加入少量的谷氨酰胺，一般是1%左右
作者: wangsandan0503    时间: 2012-4-13 09:51

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, C; T$ I: l. y5 B: z. _2 a3 |% J8 g# u9 T: f
谷氨酰胺是可以直接购买到吗？   您用的HU-MCSs培养基是什么
作者: yingjie    时间: 2012-4-13 10:27

可以购买的，网上很多，我用的是DMEM低糖培养基
作者: 加拿大STEMCELL    时间: 2012-4-16 15:22

这要看你想要用MSCs做什么啦！有篇文献把用无血清培养基和普通血清培养基培养的脐带MSCs做了对比，可以参考下：http://www.sciencedirect.com/sci ... i/S0022175910003200
作者: dyg108    时间: 2012-4-16 16:03

本帖最后由 dyg108 于 2012-4-16 16:04 编辑 : O7 x- P& H! {/ x# A/ w, ~
2 o, N* f/ R5 ^7 ~
普通实验，也不要求发太好的文章，一般的培养基就可以，LG-DMEM，FBS，谷氨酰胺（超过1 w需要添加，不含有的也需要添加。也可以用GlutaMAX替代，其半衰期非常长）。+ t" i+ S; C& I3 I9 v
如果要抗老化和分化那么最好加一些因子，如bFGF，Vc，β巯基乙醇等
作者: wangling0607    时间: 2012-5-23 22:28

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, Y8 d$ n- Z' I- |, j" k2 c0 I# x2 M' w* c3 H# d
有的有，有的没有，我买的就是有的
作者: mengnancy    时间: 2012-5-24 15:42

基础培养基和血清的选择正确与否与MSC的生长状态还是有很大关系的，我用的GIBCO的α-MEM和FBS，细胞生长非常好。
作者: nankou2008    时间: 2012-5-24 17:27

a-MEM 低糖 FBS 双抗2 n$ n. c* @/ j# j
低糖分化慢点吧
作者: shizhu198511    时间: 2012-5-24 23:27

mengnancy 发表于 2012-5-24 15:42 " V- Z6 ?' N1 k" d; ]; n
基础培养基和血清的选择正确与否与MSC的生长状态还是有很大关系的，我用的GIBCO的α-MEM和FBS，细胞生长非常 ...

; f9 u# c* {- d1 ^; K+ Z# P/ m请问你用的FBS的货号是多少，我用的澳洲远的细胞形态不是很好！
作者: mengnancy    时间: 2012-5-28 08:30

回复 shizhu198511 的帖子' Q* `7 X9 c7 A

7 Q8 @$ z" `2 o0 X, Q& i  F货号是12664025，间充质干细胞培养专用培养基。
作者: shizhu198511    时间: 2012-5-28 11:26

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& z( O3 ]5 o+ B2 p& R9 p9 P3 s( _+ `, p" r$ b5 @
谢谢好心人，当时我也查到这个血清，但是1.比较贵，2.没小包装的就选择了澳洲源的了
+ G1 |' I: Y! |* [再次敢感谢！
  O1 Z6 E/ ]9 ?看来真是一分价钱一份货！
作者: 若兰汀    时间: 2012-5-28 21:54

我们课题组用的是DMEM：F12培养基+10%FBS+双抗。就我个人而言，间充质是一种成体干细胞，这种细胞在体外长期培养肯定是会分化的，只是时间长短或程度不同而已。因为血清中有很多激素等因子。即使传代多次，形态上没有变化，也不能说明其未分化，要有核型检测才能说明问题。只能说在前多少代内其核型相对稳定。但是培养过程中的温度，二氧化碳浓度，消化方式，冻存方式等都会影响这个细胞的分化，细胞在体内之所以维持未分化状态，应该是遗传信息调控的，这个状态绝不可能在体外调整培养试剂组分就能完成的。如果想维持好的细胞形态，建议细胞及时扶壮或是定期重新分离。以上是本人的一点拙见，祝你好运，天天开心！
作者: tanrufu    时间: 2012-5-28 22:18

a-mem加5%FBS,L-谷氨酸，不加双抗，扩增到5、6代（每代保证不长过情况下）不会出现分化，当然分化状况也和脐带本身有很大关系
作者: aoppolle    时间: 2012-5-29 08:09

基本培养基的话，我做过比较，可以用IMDM，但是价格要比DMEM贵，血清质量非常重要，好坏决定实验的成败，双抗可以根据实验条件选择加，实验好的话可以不加，如果增殖速度不够的话，可以添加细胞因子bFGF、EGF 浓度10ng/ml就可以了。
作者: tanrufu    时间: 2012-5-29 23:46

我们是做临床用的脐带间充质干细胞，用的a-mem,5%fbs，有段时间细胞状态不好才2、3代就出现分化，脱壁漂浮死亡，之后才在基础上加了L-谷氨酰胺效果好多了到现在一直在加。建议用于临床的话最好还是不要加双抗的好，包括脐带分离都不要加虽然能抑菌但是也能让某些潜在的染菌表现不明显还要考虑病人对双抗的反应……尽量做到无菌操作就行
作者: tanrufu    时间: 2012-5-29 23:46

我们是做临床用的脐带间充质干细胞，用的a-mem,5%fbs，有段时间细胞状态不好才2、3代就出现分化，脱壁漂浮死亡，之后才在基础上加了L-谷氨酰胺效果好多了到现在一直在加。建议用于临床的话最好还是不要加双抗的好，包括脐带分离都不要加虽然能抑菌但是也能让某些潜在的染菌表现不明显还要考虑病人对双抗的反应……尽量做到无菌操作就行
作者: zhangy259    时间: 2012-5-31 16:04

我是用胶原酶消化法制备UC-MSC，一直用DMEM/F12（Hyclone），10% FBS（Gibco），无需添加谷氨酰胺和双抗，传至 第五代，进行成脂分化，效果还不错。
作者: 袁小懒    时间: 2013-5-6 11:14

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9 ]. z8 M+ y. w8 _& l# z
9 ]& F5 k$ C9 K* R) @; C原代细胞与传代细胞是不是都用10%FBS的？还是传代细胞实用的FBS浓度会小一点？
作者: 袁小懒    时间: 2013-5-6 11:14

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( a3 l1 ^; K) x' A2 S/ q4 l2 i6 m# \
2 ^9 |. d, H/ [3 u2 u原代细胞与传代细胞是不是都用10%FBS的？还是传代细胞实用的FBS浓度会小一点？
作者: 袁小懒    时间: 2013-5-6 11:18

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& K& x: X3 f3 z& r/ q; G+ [4 `低糖DMEM里本来就含有谷氨酰胺，另外加与不加会不会有明显的差别啊？加的量大概是多少啊？
作者: 袁小懒    时间: 2013-5-6 12:22

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3 k6 J2 G! T$ M5 m" W原代细胞与传代细胞是不是都用10%FBS的？还是传代细胞实用的FBS浓度会小一点？培养传代细胞时降低浓度是不是可以有效延缓细胞衰老？
作者: wf78365421    时间: 2014-2-10 14:11

本帖最后由 wf78365421 于 2014-2-10 14:12 编辑 # I3 [. X! B6 V% l9 {0 w
; d) e3 a! f. t5 a
L-DMEM+10%FBS即可。我是用组织块贴壁做的，大概2周即可传代。
0 C; O" ?7 K5 ^& g% ]9 s- S: T 加10ng/ml的bFGF增值更快。



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