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标题: 在提取干细胞中双抗的使用技巧、所加量的详细方法，高手请多指教 [打印本页]

作者: 相宜 时间: 2012-4-10 00:33 标题: 在提取干细胞中双抗的使用技巧、所加量的详细方法，高手请多指教

本帖最后由相宜于 2012-4-10 00:33 编辑 9 M ?# s% _) L8 H0 ]8 e. V6 ]

我提取脂肪干细胞是从抽脂手术中去脂肪悬液20ML直接倒入培养皿中用PBS清洗三遍，有人建议洗脂肪的时候就加入双抗，最近天气也热了，双抗什么时候加比较好呢？分别要加多少的量呢？我买的是这种双抗，请各位大侠多多指教呀[attach]40773[/attach][attach]40774[/attach]

作者: 临床干细胞 时间: 2012-4-10 02:54

原代细胞培养一定要从一开始就加双抗

作者: amberma 时间: 2012-4-10 08:46

洗的时候PBS就要加，
PBS和细胞培养液中均1%就行

作者: 113305060 时间: 2012-4-10 08:46

原代清洗脂肪的时候，在PBS中加入1%双抗就可以了，换液和传代不需要加的。

作者: lxm5668 时间: 2012-4-10 09:00

当然是从开始加最保险了。浓度与正常培养基的浓度相同。
建议把这瓶抗生素进行无菌分装，然后冻存，用时取一支溶解，不要反复冻溶，失效了。

作者: 相宜 时间: 2012-4-10 09:05

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浓度与正常培养基的浓度相同，大侠，这句话该怎么理解呢？3 M0 X; W P) N: b: ~8 K

作者: hesu1105 时间: 2012-4-10 09:18

想问一下，你是如何从抽脂的去脂肪悬液中提取出干细胞的呢？是IPS还直接分离的啊，谢谢。

作者: 相宜 时间: 2012-4-10 10:01

回复 hesu1105 的帖子' m. ?, h/ e. r
7 Y$ V2 x) y2 H Y1 ], G* J
就是常规的酶消化法，IPS的还没有接触到，

作者: hesu1105 时间: 2012-4-10 13:43

回复相宜的帖子2 W5 x2 q* B7 N. B0 x) M+ x, V$ `1 F
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那请问下，你用酶消化法，培养的细胞，用什么能证明你培养的是干细胞而不是成体细胞呢？

作者: avbn 时间: 2012-4-10 16:24

当然是从开始加最保险了。浓度与正常培养基的浓度相同。
& T3 d: S; U1 S" n D" w& |. d' N6 D建议把这瓶抗生素进行无菌分装，然后冻存，用时取一支溶解，不要反复冻溶，失效了

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正解

作者: 相宜 时间: 2012-4-10 21:59

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因为我要做的还有后续的定向分化诱导实验，所以这个鉴定放在后面了。本人还是个初级入门的菜鸟，说的幼稚的地方请大侠多多批评指正并给与指导。谢谢。

作者: sudaxzd 时间: 2012-5-22 13:38

以后真正应用于临床上，加入双抗，一些人青霉素过敏，怎么办？不加双抗又担心细菌污染，前段时间就是没有加双抗，导致抽取的脂肪老是污染，三甲医院抽脂环节也有问题啊。

作者: sudaxzd 时间: 2012-5-22 13:41

不知道各位高手，有没有好的建议，可以不加双抗，又能抽取到没有污染的脂肪。

作者: 相宜 时间: 2012-5-22 21:51

回复 sudaxzd 的帖子
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理论上来讲，只要保持所有步骤的无菌和所用到物品的消毒，就不存污染问题

作者: 细胞海洋 时间: 2012-5-22 22:58

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作者: 相宜 时间: 2012-5-29 00:13

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成体细胞一开始形态是相对固定的，而脂肪干细胞都有个生长分化的形态上的变化。这点不就足以证明了吗？

作者: yanwu_1 时间: 2012-6-11 13:18

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取稳定传代的细胞做流式检测间充质干细胞表型。

作者: yanwu_1 时间: 2012-6-11 13:19

回复 sudaxzd 的帖子

脂肪洗涤以及消化后贴壁的过程中可以加双抗，在确定无污染后，放抗可以去掉。

作者: 帝国黑骑士 时间: 2012-6-12 16:51

原代培养，一般都需要加双抗的，后期收集用的时候可以多洗几遍，就能洗掉的，至于配置吧！我们想在采用的事100u/ml 的浓度！希望对你有用。

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