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标题: 如何设计miRNA正向引物 [打印本页]

作者: lilyinsun1 时间: 2012-4-10 14:26 标题: 如何设计miRNA正向引物

我想咨询一下您如何设计miRNA正向引物各位前辈不吝指教！

作者: frankieisme 时间: 2012-5-2 00:15

正向引物长约20-25个核苷酸,在3'断有6-10个核苷酸与相应的miRNA互补,剩余的核苷酸的Tm值高于65度.

作者: zhlqlkpc 时间: 2012-7-11 16:32

首先要看你的逆转录的策略，有些是在逆转录过程中加上很长一段尾巴，这样，在PCR时，上游是成熟miRNA的部分序列，下游是根据共用的"尾巴“的最后一段。如果逆转录不是这样做，PCR引物设计策略也要相应修改的，如果用茎环结构设计引物，不是在3‘端加尾，那上游引物取成熟序列前14-15个碱基。我的实验步骤，在这14个碱基前加了GGG（或者GGGG）这样上游引物碱基数目就达到17-18个了。

作者: mzaq2006 时间: 2012-12-10 22:56

回复 zhlqlkpc 的帖子' C, O* {( S( u" w: r6 H2 F

对于miRNA引物设计能否详细说明一下，非常感谢

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