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标题:
关于mES细胞培养中发生分化的问题
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作者:
YYQ6301
时间:
2012-5-2 09:19
标题:
关于mES细胞培养中发生分化的问题
请问一下，大家在小鼠胚胎干细胞正常培养的过程中有没有出现分化的现象？如果有，大家又是怎么处理的？如果没有，是不是一直传下去都没有分化现象，是如何做到的呢？希望大家能够谈谈自己的经验，交流一下，谢谢
作者:
scienese
时间:
2012-5-2 10:27
你的培养基是还血清的还是无血清的呀，血清会有影响啊！另外，添加2i会有抑制分化的作用
作者:
YYQ6301
时间:
2012-5-2 13:10
嗯，我们用的是有血清有Feeder的，LIF的浓度用的也是标准浓度
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作者:
cochongg
时间:
2012-5-2 19:54
有分化是正常的，不过是个别，不要太多分化。
* m3 _: x/ Q& A5 T g
具体还是要看整体细胞状态。
/ L( D) l* r3 b2 u5 R$ t S/ S9 A/ R
建议：1、细胞状态好代数低的时候就该冻存一批，以备后用，不要一直传。
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2、细胞状态不好，分化多的时候，就别指望起死回生，再传也不会太好。（个别牛人例外）赶紧复苏吧
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3、传代要一传N，或者按几个细胞浓度传。（这样好处是：得到不同状态的细胞，供对比作出调整，同时差的扔了，好的实验用或者继续传）
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# z" l& R4 e5 ?
希望对你有帮助
, \6 n+ C$ z, V# C
作者:
YYQ6301
时间:
2012-5-3 14:46
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cochongg
的帖子
9 b; ~. _# q9 C' d
( b' o& L; u; ^. S
这个建议不错，只是这样比较浪费呵呵！问一下你们一般传几代出现这样的问题啊，我们一般穿到3到4代的时候就会看到分化的迹象，真的是有点困惑!!!
作者:
cochongg
时间:
2012-5-3 20:41
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YYQ6301
的帖子
9 q! h/ g* ~: o' C7 s4 D
: Z% ?+ w7 s( n1 H
不要将焦点集中在分化的个别克隆团上面，要整体状态好。
. v4 T: _9 E3 `4 p1 d
我们实验室养的ES也有分化，每代都有，具体是镜检看到克隆团的边缘有分化。
) C/ F& C/ ?# o9 y: m7 t; N; x: ?
原因是：个别细胞启动了分化程序，并且会通过细胞信号影响周围，且不可逆。
作者:
YYQ6301
时间:
2012-5-4 09:05
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cochongg
的帖子
& O0 J7 ]% l* [3 U' W( O- l3 h0 U
/ p, `$ M d J
嗯 那就放心了 主要是boss总觉得我们细胞养不好 郁闷的
作者:
guoye0210
时间:
2012-5-4 15:01
我们实验室也遇到同样的问题，总是传个3-4代就分化，很无奈。ICR饲养层，血清用的GIBCO，LIF用的invitrogen
，反反复复的复苏中....:
作者:
kalaka
时间:
2012-5-6 21:34
是啊 我们也是 我们养在明胶上，LIF是COS细胞自制的，很不稳定
3 q8 Q3 x& N8 S
个人觉得mES很念旧，喜欢熟悉的手艺和试剂
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可以尝试挑克隆，再扩起来看看
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作者:
YYQ6301
时间:
2012-5-7 15:48
看来不少人遇到这样的问题，我们可以讨论讨论，交流经验，呵呵
作者:
vegetax4132
时间:
2012-5-7 19:56
我们实验室前段时间一直用KSR+LIF+feeder养 状态很不好
5 ~9 E& B& i) {6 I8 d3 I
最近换了MES+LIF+feeder 状态挺不错的
作者:
YYQ6301
时间:
2012-5-17 09:09
郁闷呐，我们这次复苏出来，直接就有分化迹象了
作者:
wlj0912
时间:
2012-8-17 14:40
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YYQ6301
的帖子
1 Z+ }2 h7 R# s! K/ H# e
) w3 i& h# a* t: U2 Z
mef 铺的厚一点可以吗，我以前发生分化是因为饲养层太薄了，后来多传了几代细胞又恢复了。
作者:
李夏
时间:
2012-8-19 09:13
我用的是无血清培养，因为要筛药 不能用血清培养，无血清培养传个两三代就分化了 有没有高人指点一下啊 感激不尽啊
作者:
细胞海洋
时间:
2012-8-19 20:50
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李夏
的帖子
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; o2 D# Z& H1 w' N2 w. Y0 D4 E
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/ t& B5 D' S+ Y) Q0 T5 e/ ~
作者:
chenks
时间:
2012-9-8 22:50
就我的经验来时,小鼠ES细胞不是那么容易分化的.Feeder+普通的mES培养基+lif;Feeder+KSR+Lif; N2B27+2i+Lif有无Feeder均可;三种方法都可以.注意的是Feeder时3天传一次.每次1/100-1/200;无Feeder时,最好计数,6孔板每孔10万.
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有分化是正常的，不过是个别，不要太多分化。不要将焦点集中在分化的个别克隆团上面，要整体状态好。
，反反复复的复苏中....:2 L: C; r9 h7 t5 h7 R# w