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标题: 质粒转染遇到的问题 [打印本页]

作者: daviddow 时间: 2012-5-2 20:48 标题: 质粒转染遇到的问题

我的质粒转染使用lipo2000,带有GFP，在24小时还有绿色荧光，可是G418筛选了几天后，GFP没有了.
大家遇到过这种事情吗？怎么解决？谢谢

作者: b6122 时间: 2012-5-2 23:40

提高细胞的密度，这样稳定转染的几率大一些。G418不要一下子用得很高。你需要先测试最低致死的G418用量。比如在24孔板放入不同浓度的G418，每3天换一次液，2周之后看哪些浓度下，细胞全部死了，然后用其中最低的浓度处理转染细胞。
另外转染的时候多做一些。他们有人认为多转染几次可以提高效率，不过我没有试过。

作者: lxm5668 时间: 2012-5-3 09:37

我当时做RNAi质粒转染时也带GFP标签，后来发现也看不到荧光了，但是没有影响克隆的筛选，蛋白干扰效果也很好，mRNA检测也很好。继续做吧！

作者: zxcv12345 时间: 2012-5-3 09:42

回复 daviddow 的帖子

这个？没看明白: O1 f# e8 a$ v6 W5 |( J& K/ b
( P. Y) V/ R+ K- o7 n
G418筛选GFP？
3 }% F% V4 F& y/ Y9 i) ]+ I" r! N
你的转染肯定没问题的。转染后大部分都是瞬间表达，时间长了消失很正常，
只有少部分会插入基因组的，你要筛的是这部分

作者: daviddow 时间: 2012-5-4 10:29

谢谢各位对我试验的指导，谢谢啦

作者: sdjjfangfang 时间: 2012-5-8 21:53

回复 daviddow 的帖子6 Y- x$ k5 s9 U) u

质粒转染，不同与病毒转染，在转染之后GFP会掉一些是很正常的，如果想要稳定表达GFP的细胞，可以考虑用病毒转染。

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