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标题: 脐带间充质细胞传代问题 [打印本页]

作者: henryjia 时间: 2012-5-8 19:04 标题: 脐带间充质细胞传代问题

本帖最后由 henryjia 于 2012-5-8 19:08 编辑

我的脐带间充质细胞似乎P0传代消化有问题。但是一旦到T75培养瓶后似乎就[attach]41822[/attach][attach]41822[/attach][attach]41822[/attach][attach]41823[/attach][attach]41823[/attach]消化的很快了。不知道大家是否有同样问题？

作者: Tim 时间: 2012-5-8 19:14

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在外界条件没变得的情况下，只是培养瓶变化吗?是一个厂家的吗?感觉是心理原因

作者: shizhu198511 时间: 2012-5-8 19:55

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感觉你的细胞形态很不错了，和买的成品间充质干细胞培养基做出来的差不多，我的细胞比较粗大，请问你原代的血清浓度是多少？我的是10%，感觉原代就变得又宽又大了

作者: menghy 时间: 2012-5-8 21:56

细胞消化传代根据你细胞的密度，活性来决定，还有就是所用酶是否有变化。8 y! t! l% f- m) u2 ^ s( a
按道理更换培养瓶是不会出现细胞消化时间缩短的。你要看你培养条件和以前的相比是不是有改变的地方。

作者: henryjia 时间: 2012-5-9 04:03

我感觉和更换培养瓶无关，大家可能误会我的意思了。我不是想说因为更换培养瓶而发生。我想探讨是不是传代的原因-从P0到P1，P2细胞发生某些变化，反应带对于消化酶的敏感性？谢谢大家关注。

作者: 千里草 时间: 2012-5-9 07:59

个人觉得P0代的细胞可能长梭形比较明显在后面的传代过程中细胞逐渐变短，这可能跟传代后细胞的活性变化有关，因为传代次数越多，间充质的特性回发生变化。当然，也要适当掌握消化酶的作用时间及浓度等因素。

作者: chrismine 时间: 2012-5-9 12:22

形态还行的，P0代时候个人感觉需要注意的就是一个消化时间问题，一个就是存在分化的问题吧。P0的细胞感觉很脆弱，分化的时间需要掌握好。时间稍微一长的话就会造成细胞壁变薄的情况。分化问题上，传代的时候你的MSC会随着你得传代次数出现分化的，这个很正常，如果你要是留有照片的话就会发现原代细胞形态和传代几次后细胞形态有差异。不过这影响不大。

作者: haibara007007 时间: 2012-5-14 23:05

你提到的是不是p0代比传代后消化时间更长？其实这是很正常的，因为刚消化完p0代的细胞比较杂，干细胞的含量也比较低，所以消化时你会感觉比较长，经过传代后，细胞得以纯化，消化时间当然明显变短了，也是很正常的，你的细胞形态不错的。

作者: nankou2008 时间: 2012-5-16 09:04

照片是几代啊？形态很好了我做的到第三代就变大了都不是长梭形了

作者: tanrufu 时间: 2012-6-1 18:52

消化时间长短应该跟你所用的消化的胰酶的酶效和细胞生长密度有很大关系吧，应该与培养材料不存在大的关系。看你的图片，细胞状态很好啊。还有就是P0代细胞培养中本身就含杂比较多，往下传细胞相对纯化得多。你说得这种情况应该是正常现象吧

作者: toncv 时间: 2012-6-6 22:44

你好楼主，我也在做相关的实验。你可以分享下你分离培养脐带间充质干细胞的方法吗？我们用的淋巴细胞分离液分离，STEM CELL的培养基培养，感觉形态没你的好

作者: 欣雨1121 时间: 2012-6-7 11:15

消化时间有些长了吧我的P0代细小形态要比这好些啊

作者: yanwu_1 时间: 2012-6-8 13:25

其实，细胞在高密度下，由于传代导致的分化或表型变化，以及细胞密度过大导致的接触抑制，都可能是消化时间变短，细胞的敏感性增加。

作者: 帝国黑骑士 时间: 2012-6-8 17:27

这个消化时间，第一可能是你的心理作用，第二p0代细胞消化的时候和p1代细胞消化是不一样的，p0代细胞少而且纯度不高，所以消化后观察细胞回缩不明显感觉不是很好消化，p1代之后细胞出度高消化观察明显！这和瓶子是没有什么关系的！

作者: maozhuxiwo1 时间: 2012-6-11 15:57

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有可能是血清的问题吧，请问你们用的是哪家的啊？
MSC对血清要求也很高

作者: 上官冰梦 时间: 2012-6-13 07:43

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我的也是消化时间特别短基本上加上胰酶就能下来了，但是问题不大，酶对细胞作用时间短反而不会伤害细胞。我想问你一下你都是让细胞长到这么满才传代吗？: k8 `7 R6 N& @" G9 H

作者: kingyou117 时间: 2012-9-2 21:12

是的，这个跟代次是有关的，一般P1→P2酶消化时间偏长大概在2分钟左右，到P2→P3时大概就在一分钟一下！应该是跟细胞的活性有关！

作者: 445334587 时间: 2012-12-20 10:03

原代细胞长得比较密，细胞之间的间隙太小，用胰酶消化时无法充分接触细胞，故消化时间要长一些，而传代细胞之间的间隙比较大，所以相对好消化一些，还有你的细胞长的太满了，80%就可以传代了。

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