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标题: 求助：miPS的RNA提取 [打印本页]

作者: ligangtiancai 时间: 2012-5-13 21:58 标题: 求助：miPS的RNA提取

RT，求高手指点，miPS在提取RNA时如何去除MEF？

作者: wwy551 时间: 2012-5-14 00:18

回复 ligangtiancai 的帖子3 N! H: n3 |2 i1 c
3 K$ @9 q0 [6 y* O
本来想说可以用干性marker区分MEF和miPS，然后用FACS分选出 miPS细胞群。这也是很常规的从一群细胞中分选特定亚群的方法。楼主是不是可以考虑一下直接在显微镜下挑克隆，尽量挑取克隆最中间的部分，以防MEF污染，克隆周围的部分舍弃。再用小提RNA的Kit提取即可，这个对于细胞数目要求不高，而且相比FACS简便。

作者: shangchunhua 时间: 2012-5-14 09:46

楼主可以根据IPS和MEF贴壁速率的不同将它们分开

作者: Yedan 时间: 2012-5-14 14:47

b. 诱导多能干细胞传代6 Y$ |& W2 u- h/ l
取60-mm培养皿每个加入3 ml 0.1%明胶溶液，37℃包被30分钟以上。
吸掉培养基，加入PBS清洗一遍，每个60-mm培养皿中加入1 ml 0.25% Trypsin，37℃孵育2分钟。
加入2 ml DMEM 培养基，用1 ml 枪头轻轻吹打3次，将细胞悬液转移至15-ml 离心管，1200 rpm离心5分钟。. K) W, B$ U4 c; k) _
吸掉上清，用4 ml KOSR-DMEM培养基重悬，转移至明胶包被的60-mm培养皿，37℃，5% CO2培养，让滋养层贴壁40分钟。% B7 K: d1 U Q7 J4 o% R
将60-mm培养皿中细胞上清转移至15-ml 离心管，1200 rpm离心5分钟。
吸掉培养基，用4 ml KOSR-DMEM培养基重悬，按照1：4的比例分至3个铺有滋养层细胞的60-mm培养皿，37℃，5% CO2培养。" F7 O5 C T- n) C$ j; a/ {
将就一下吧，我本科的时候写的，基本都对

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