干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 关于小鼠iPS培养中的疑问 [打印本页]

作者: your1024 时间: 2012-5-14 20:02 标题: 关于小鼠iPS培养中的疑问

1、MMC处理后的MEF可一直冻存，直到解冻miPSc然后接种在上面么？如果不立即种到铺好明胶的皿上观察怎么知道制作的feeder好不好呢？
2、能不能给些详细的miPS培养中需要使用的试剂（培养基、酶等）列表（公司、批号等）以及配置方法呢？请注意是小鼠iPS。或者给个参考帖子或文献都可以哈！$ W2 R* k3 _: m( B6 ~! O
3、再问一下，能不能给些miPS培养过程的protocol呢？谢谢啦！8 Z* W: r. a8 Q7 i$ o' _
真的是新手，都开始养MEF了养iPS要用的东西还没配齐，被老板知道了不知道得骂成什么样。恳请指教哈！

作者: sanfa 时间: 2012-5-14 21:44

1 mmc处理前的mef状态要好 mmc浓度和处理时间对就不会有问题
2.gibco官网去找
3.文献很多自己找

作者: frankieisme 时间: 2012-5-15 01:16

ES medium DMEM containing 15% FBS (vol/vol), 2 mM L-GIn, 1 10–4 M nonessential amino acids, 1 10–4 M 2-mercaptoethanol, and 50 U and 50 mg ml–1 penicillin and streptomycin. To prepare 500 ml of the medium, mix 75 ml of FBS, 5 ml of L-GIn, 5 ml of nonessential amino acids, 1 ml of 2-mercaptoethanol and 2.5 ml of penicillin/streptomycin, and then fill to 500 ml with DMEM. Store at 4 1C for a week.

作者: frankieisme 时间: 2012-5-15 01:20

种MEF细胞不需要事先铺明胶, MMC处理MEF最好是在MEF张好(80-90%)后,MMC作用3h后换新鲜培养液就可以做为feeder了,MMC处理过的feeder可以再养7d时间,不过做好现做现用.

作者: your1024 时间: 2012-5-15 21:36

回复 frankieisme 的帖子
% D6 H9 _$ L4 i8 q- ^
请问有没有成品的miPS培养基呢？就是什么都加好的？有没有推荐的产品？谢谢！

作者: frankieisme 时间: 2012-5-15 22:41

回复 your1024 的帖子# d- U; n$ w" ?. e8 k* B8 O& z4 S+ V

这个东西国内好像有些公司有卖,忒坑爹啦,1000多一瓶.其实自己配很容易地.lif你在用的时候再加到dish或者flask中就可以了,其他的可以每次陪200到300ml的量.

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)

Powered by Discuz! X1.5