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标题: 求助：Yamanaka factors [打印本页]

作者: franklinhg 时间: 2012-5-14 22:49 标题: 求助：Yamanaka factors

如题，由于现有的质粒都是别人给的，拿回来后也没有验证过。小弟做小鼠的iPS两次了，结果都没有克隆出现。现在老板催的急，再做不出来的话，估计要直接走人了。恳请大家帮助小弟一把，能否给予这些质粒一点？十分感谢！

作者: frankieisme 时间: 2012-5-15 01:30

你现在在哪?还有你SNL细胞以及MEF细胞状况如何?MEF细胞最好不要超过第3代.还有病毒包装的情况?比如293细胞\包装质粒\转染方法?

作者: frankieisme 时间: 2012-5-15 01:31

要有耐心,一般需要2周到3周才能见到克隆的.

作者: Yedan 时间: 2012-5-15 11:01

回复 franklinhg 的帖子5 K/ t9 r4 F9 A8 d0 _( }
R/ S( t+ d' u* o1 v4 ~; N, n
在上海么？你是用的经典的pMX质粒做的？参照06年Yamanaka他们那套么？麻烦问详细点

作者: yyshpy 时间: 2012-5-15 12:42

你好像对这方面了解的挺少的，多了解一点吧，也极有可能是你做法的问题，多看看文献，和做过的人交流一下，应该是能做出来的，而且现在改进的方法也很多了，可以看看，借鉴一下

作者: meister 时间: 2012-5-16 08:54

回复 franklinhg 的帖子- r( j U X: Q% R' m
1 b2 e l" A/ R& W- l
先验证，再求助。
别人再给你的也也不一定对。
验证是必须的

作者: franklinhg 时间: 2012-5-16 16:01

回复 Yedan 的帖子" G0 d7 [" [7 J3 z( B6 ~
7 k% O/ k8 t5 \
是的就是06年的Yamanaka的那一套系统

作者: franklinhg 时间: 2012-5-16 16:03

回复 yyshpy 的帖子

现在是我和这边做过的人交流请教了但是老板不愿意用其他系统的只用Yamanaka 06年的不愿意花钱

作者: franklinhg 时间: 2012-5-16 16:06

回复 meister 的帖子
1 Y3 @: S( ?) v3 r) d9 O3 V
这个只要做过分子克隆等的都清楚，最主要是现在这个老板是临床的然后分子这些根本就是七窍通了六窍-----一窍不通。但是还要瞎指挥，乱安排。。。结果，什么课题实验在他眼里都是很easy的。而且还不希望自己重复，说是浪费钱。就差把我气的吐血了。

作者: franklinhg 时间: 2012-5-16 16:07

回复 Yedan 的帖子! W4 L/ L: T7 K) y

不好意思我不在上海现在在深圳。

作者: Yedan 时间: 2012-5-16 16:48

回复 franklinhg 的帖子) U! ?7 r( e8 ?) |3 w( E% N% D

呃，给你几点建议吧：1.转染技术要过关，否则病毒滴度没保障，尤其是你说了少花钱这一点，就不可能去浓缩了，另外包完毒一定要测滴度，至少得有7次方吧；2. 感染的时候要算MOI，不要乱加病毒，不是越多越好；3.诱导过程中要有耐心和关心，多观察现象，MET/Oct4-GFP这些，自己要及时拍照记录。大概这些吧，我急着出去不好意思，实在不行，你留联系方式，我们再联系。噢，还有一定要确保你们的细胞没支原体，这一点非常重要。另外小声说一句，Yamanaka那套体系，我做的时候是6，7天出GFP阳性...，12天就开始挑了...

作者: franklinhg 时间: 2012-5-17 13:26

回复 Yedan 的帖子- q. e5 U6 q/ }5 G/ T J
* S+ K# @ M1 I* C
QQ286287818

作者: Yedan 时间: 2012-5-17 13:41

回复 franklinhg 的帖子
5 Z# [* `2 w( \, h5 ^
我加了，如果还有什么问题，论坛QQ联系吧，祝好！

作者: meister 时间: 2012-5-21 08:55

回复 franklinhg 的帖子
+ v& ^# |: H, X' y) t. g e
那就没办法了，不然自己私下做做看:)

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