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标题: 我做了一个重组质粒转到DH5a中，想长期保存菌种在-80，可否不用程序降温盒，直接放？ [打印本页]

作者: 紫竹驭风 时间: 2012-5-16 09:00 标题: 我做了一个重组质粒转到DH5a中，想长期保存菌种在-80，可否不用程序降温盒，直接放？

如题，求赐教

作者: momocy 时间: 2012-5-16 09:24

我不知道标准的是怎么样，但是我都是直接放的，没什么问题。拿出的菌种用起来没问题。

作者: momocy 时间: 2012-5-16 09:27

我咨询了一下，菌液和40%甘油按1:1（V:V）混匀后直接放-80℃就可以了，因为甘油具有保护作用。一些活力差的菌会死，但大部分的菌都会很好保存。不需要程序降温。

作者: Demon_CN 时间: 2012-5-16 09:36

对你说的质粒不太了解，% v1 G7 o: I& W  l, y* {7 m
我是研究细胞的，' q, k' Y  B. t
细胞冻存讲究的是缓冻速溶。缓冻所以用程序降温盒，缓慢降温" s- F+ T: n( O! u( K' ^, V
当细胞已经降到-80的温度就没有必要用程序降温盒在-80里保存了，直接可以放1 q# d4 r. Y( _* w# l7 E
但是细胞放-80时间过长复苏活率会越来越低的，对你研究的质粒不知道会不会: t, {+ g: ^5 A/ S0 x3 ~  O$ ~1 l
希望能够帮到你& d( c) f  Q8 I: V

作者: 紫竹驭风 时间: 2012-5-16 10:14

谢谢大家的热心帮助

作者: 你点点 时间: 2012-5-16 10:47

并在时甘油浓度不易太高，在15-20之间即可，如果甘油浓度过高会引起质粒的丢失。

作者: 你点点 时间: 2012-5-16 10:47

保存时甘油浓度不易太高，在15-20之间即可，如果甘油浓度过高会引起质粒的丢失。

作者: 你点点 时间: 2012-5-16 10:47

注意甘油一定要高压灭菌

作者: jedicheung 时间: 2012-5-16 11:43

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作者: huangcong1988 时间: 2012-5-17 21:49

保菌的话，直接加甘油就行，终浓度30%，而且您为啥一定要在负80里面保存呢？负20度就行了

作者: langziforever 时间: 2012-5-27 22:35

当然直接放了，我们加200ul 80%甘油+800ul新鲜对数生长期菌液，冻存过几千管，都没有接不活的！

作者: sylar.wy 时间: 2012-5-28 01:07

dh5a放-20就可以了吧…如果真要长期可以-80，直接放就可以…

作者: flashlab 时间: 2012-5-28 01:45

速冻没有问题的，重组菌最好涂板传代几次后再保藏

作者: keren4808 时间: 2012-6-9 17:59

50%的无菌甘油然后和对数生长期菌液1:1混匀冻存即可。当然—80保存时间更长，实验室有冻存3年以上的还是可以孵出来的

作者: youzi821 时间: 2012-6-26 10:05

可以直接放，我以前都是这样存的

作者: 风雪叶杰 时间: 2012-6-26 16:34

一般直接加15%终浓度的甘油可以保存一年左右。DMSO也可以啊，干嘛需要程序降温啊，我都是直接放的。

作者: pailishi 时间: 2012-6-27 08:36

甘油终浓度30%，-80冻存没问题，我冻存了9年的菌拿出来也一样能复苏使用！

作者: wcfeng88 时间: 2012-6-27 08:59

可以同时做两种保存方案：1.直接保存质粒DNA。DNA水溶液直接在﹣80℃中长期保存不降解；或先把DNA沉淀下来后保存在70%的乙醇溶液中，在﹣80℃中长期保存不降解。DNA量大的话以后可以直接拿出来使用，或者把它转到DH5a中大量扩增。2.含有目标质粒的DH5a，在20%-50%的甘油中均可以直接在﹣80℃中长期保存，用的时候直接拿出复苏就可以了，一般不建议程序降温。两种方案同时用上，可确保万无一失。

作者: holywater 时间: 2012-6-27 09:47

負80好。百分之二十甘油。可保存一年。

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