干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 小鼠尾部成纤维细胞的培养问题 [打印本页]

作者: 2006sw0657 时间: 2012-5-23 10:40 标题: 小鼠尾部成纤维细胞的培养问题

你好我最近也在试着养小鼠尾部成纤维细胞请问老鼠的尾部毛发怎样去除或者怎样正确取到想要得到的小鼠尾尖且不会染菌？ thank you

作者: christophe 时间: 2012-5-24 23:37

不是除去毛，而是将皮全部剥离。
我告诉你具体方法吧：5 A# U2 h3 S. d/ B( N4 U
尽量剪长些鼠尾，如果小鼠不继续养了，就把鼠尾全部剪了。% b8 i3 [: d- ]
酒精中浸泡一下，然后放到PBS中，用剪刀或者刀片在尾巴粗端剪断处划一个小缺口，然后用尖头镊子夹住鼠皮翻转，夹牢翻转几圈以后，用力向下拽，整个尾巴的表皮就被翻转拽下来了，很完整的。将最上端剪去不要，剩下的再剪短放到medium中养就可以了，大概一周左右TTF就出现了。

作者: yuanyan2010 时间: 2012-5-25 09:45

做到无菌的话，要将剪好的老鼠尾巴放70%酒精里面浸泡20分钟。然后用无菌的器械将表面的鼠毛尽量去掉。我们也就做1cm左右的尾尖。4-5天左右可以看到。

作者: 2006sw0657 时间: 2012-5-25 10:00

回复 christophe 的帖子& w' d) X6 a9 `0 a. ]# ^4 p

先向你说声 thank you 我先示范做一下具体出现问题的话再请教你

作者: 2006sw0657 时间: 2012-5-25 10:01

回复 yuanyan2010 的帖子
( r5 l" v( b- \7 `/ R2 o- U7 W0 S6 I
谢谢我先试着做个预实验

作者: 2006sw0657 时间: 2012-5-29 20:36

回复 christophe 的帖子! V; X( a* r5 c

你好我按照你的方法去做养了三天发现里面有许多密密麻麻的小颗粒，师姐们说是细菌怎样才能避免染菌呢谢谢！

作者: 2006sw0657 时间: 2012-5-29 20:39

回复 yuanyan2010 的帖子
. N, Z" R+ p9 K+ L& K; k& c' |
我把小鼠尾巴剪下来后放在75%酒精里面浸泡15分钟，然后剥皮，剪碎，放在六孔板里面养了三天，发现里面好多密密麻麻的颗粒好像染菌了怎样才能做到无菌呢谢谢

作者: christophe 时间: 2012-5-29 20:43

是不是不大，但也不小，圆形透明的那种，但不会动？那不是染菌，正常的，再过两天，你仔细看平皿底部，会有MEF样的细胞贴壁就是了，至于这密密麻麻的颗粒可能是鼠尾迁移出来的TTF但还没贴壁铺展，或者其他种类的细胞。最好用贴壁性好些的平皿

作者: christophe 时间: 2012-5-29 20:44

回复 2006sw0657 的帖子 E2 q; r6 T' |" |$ X$ T
( Y7 ?9 r3 U9 b/ V b
刚好在线，给你回复了

作者: 2006sw0657 时间: 2012-5-29 20:52

回复 christophe 的帖子1 b9 X w' e) E+ F- n

我有拍照的不过可能内存太大，上传不上去，最近电脑好像坏掉了，刚开始是像你所说的那样，圆形透明的，不过今天（第3天）颜色变深了，好多密密麻麻的黑色颗粒，但培养基颜色也未曾变黄，我QQ ：670686944 如果方便的话 QQ联系

作者: 2006sw0657 时间: 2012-6-5 20:37

回复 christophe 的帖子) X6 v" b# w w# o
0 q1 S0 ~8 u0 v+ s* S( j7 z
你好我用一周左右的ICR乳鼠取其皮肤和尾巴酒精消毒20分钟，怎么养了24小时还是染菌还请你指点？你现有尾部成纤维细胞吗？方便联系点用吗

作者: 2006sw0657 时间: 2012-6-5 20:38

回复 yuanyan2010 的帖子; U+ a- j7 C, z3 p" z! c9 A/ ^
; ~7 X" Z1 N9 u
你好我用一周左右的ICR乳鼠取其皮肤和尾巴酒精消毒20分钟，怎么养了24小时还是染菌还请你指点？你现有尾部成纤维细胞吗？方便联系点用吗

作者: christophe 时间: 2012-6-5 20:53

回复 2006sw0657 的帖子' _) J( n# E- ^- N9 d6 \# C

酒精只能抑菌不能完全杀菌。你取大一点的小鼠，成年小鼠可以取7-8cm长的尾巴，把外表皮剥离不要。我是以前做的，手头上现在没有。

作者: 2006sw0657 时间: 2012-6-6 10:23

回复 christophe 的帖子
1 Q& v4 ^' f% [3 { M6 w2 X
你好外表皮剥离时候会不会把真皮带走是将剥离表皮后的尾巴剪碎吗？

作者: christophe 时间: 2012-6-6 19:52

回复 2006sw0657 的帖子

外表皮应该大部分都是角质层之类的吧，不会完全带走的，残留的细胞会慢慢爬出来。对，是将剥离表皮后剩余的软骨剪碎培养。剪碎后放入10cm平皿，多加一些培养基（我加20ml），放入后就不用管了，四五天以后再换液。
放心，肯定能做出来的。8 o8 J0 _" ]& E: P4 D7 L# @
我用的CORNING的平皿，用之前gelatin包被一下。

作者: 2006sw0657 时间: 2012-6-6 20:42

回复 christophe 的帖子1 F: |0 H8 {& N6 Q
: L8 v. l* m z8 H% j7 y
非常感谢我再按照你说的方法去了试着做一下

作者: zmm 时间: 2012-6-6 22:38

你要注意一点是要在pbs中加双倍的双抗，这样污染机会就会小很多。。。

作者: 2006sw0657 时间: 2012-6-11 14:42

回复 christophe 的帖子2 Q/ s7 @3 g1 Y' E4 N
$ L/ u1 c) P9 M& w* \- F* `
你好我按照你提示的方法重新做了一次没染菌现在是第四天已经有细胞长出组织块什么时候去除? 是在消化传代细胞时候再取出吗？

作者: christophe 时间: 2012-6-11 15:36

好的，恭喜你！
无所谓吧，反正放在里面也不碍事，我是在第二次换液的时候除去的。

作者: 2006sw0657 时间: 2012-6-19 11:48

回复 christophe 的帖子
! q$ L0 ~9 h8 @8 H. L
你好现在还有个问题向你请教我用的是凝胶包被的平皿细胞养是养出来了状态也不错 but 消化是用0.25%的胰蛋白酶消化消化十几分钟都很难把大部分细胞消化下来，并且消化下来的细胞养2天状态很差，是不是因为培养基里面不加双抗的原因，还是消化过程中的问题?

作者: xiaxin1900 时间: 2012-6-19 14:05

避免不污染：首先去尾巴时尾巴要用75乙醇喷洒，刀片也要用酒精擦后烧一下。之后鼠皮在75乙醇中泡30s-3min(自己把握时间)，之后要在加双抗的PBS中洗，洗5次左右，就差不多了。

作者: 暗红色的风 时间: 2012-7-8 17:21

请问大家做的是什么小鼠种类呀，我也准备养IPS细胞。谢谢赐教。

作者: 2006sw0657 时间: 2012-7-9 14:50

回复 christophe 的帖子9 y# k+ o- R3 y8 B' Y" g2 _+ C/ N

你好游离出的小鼠尾部成纤维是不是因为混有其他细胞发现做了这么多次原代状态还可以消化下来状态很差

作者: christophe 时间: 2012-7-11 13:20

回复 2006sw0657 的帖子% u5 x# @- V1 h T1 p8 b( t
8 q: I1 M5 B8 _, l
肯定会有一些杂细胞吧，我原代细胞长好了以后消化计数一下就用来铺细胞做实验了，基本上算没传代。它是成体细胞，活力肯定不好，传代以后状态差是正常的吧。

作者: dilal 时间: 2013-8-9 09:25

好像很难避免污染，养了两次，都污染掉了，只在培养基加了双抗！PBS也需要加双抗吗？

作者: XQGXXM 时间: 2013-8-13 22:24

用小鼠尾巴的表皮也可以养出TTF

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)