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标题: 求高手~CIK [打印本页]
作者: LL87    时间: 2012-5-23 17:22     标题: 求高手~CIK

急急急！！养的脐血CIK细胞十三天了，做流式细胞仪检测，CD3表达阳性率达93%，而CD56表达在培养10几天后只有1.78% 左右， 问什么呢？求好心高手指点！
作者: LL87    时间: 2012-5-23 17:23

别让帖子沉了，坐等高手指点~
作者: 金戈    时间: 2012-5-23 23:12

你是用什么因子刺激的，可能跟你刺激的细胞因子活性有关系
作者: 花饶然    时间: 2012-5-24 08:51

我做外周血时也遇到过，双阳性表达率很低，请问何故，也有人说双阳性细胞并不绝对影响治疗效果，是这样吗，有高手赐教不啊？
作者: 懵懂干细胞    时间: 2012-5-24 09:26

期待高手帮你解答 顶一个哈
作者: 细胞海洋    时间: 2012-5-24 10:31

回复 花饶然 的帖子
, x' g+ A. |/ ^0 U6 d+ s: j" ^
3 M1 K7 d: d7 S' j6 p- {你询问谁 就点击对方帖子中的回复按钮 然后输入内容  像我这样
' v( M/ j& g5 R$ x3 V7 o
# f# n6 i; K+ f: m& _# [& Q否则对方会看不到的
作者: wagumaxida    时间: 2012-5-24 14:50

本帖最后由 细胞海洋 于 2012-5-24 23:45 编辑 8 t# F+ [8 n2 T2 S  W. j
LL87 发表于 2012-5-23 17:22 * O7 }7 y% ~9 H' {
急急急！！养的脐血CIK细胞十三天了，做流式细胞仪检测，CD3表达阳性率达93%，而CD56表达在培养10几天后只有 ...

7 Q3 [; _7 A! m6 l% L
) m- e$ H" x$ s7 \: m! d很大程度上是个体差异导致的，另外流式操作，试剂也会有影响：比如CD56抗体问题，补偿没有弄好 给你两篇文献看看 希望能对你有所帮助: p/ g% `3 ]: j, p8 m( X" P" F
[attach]42512[/attach][attach]42513[/attach]
作者: LL87    时间: 2012-5-24 17:27

用IL-2，CD3,PHA等，增值没问题，就是达不到双阳性，CD3表达的再高，CD56那么低，也不是个成功的，临床治疗效果也不会很好。2 q8 J, m9 @3 T: l
作者: LL87    时间: 2012-5-24 17:27

回复 wagumaxida 的帖子- `) a) _% Z, k' t

+ M6 ?0 b' s3 F* h我下载下来看看呢，谢谢
作者: LL87    时间: 2012-5-24 17:30

回复 金戈 的帖子, @/ w7 J$ T3 r* j$ r0 |
, Y4 [" h1 V, x2 Q2 E
加大IL-2的剂量了
作者: LL87    时间: 2012-5-24 17:31

核心问题没解决啊
作者: LL87    时间: 2012-5-24 17:35

回复 wagumaxida 的帖子
$ h0 G, n5 }5 U8 ~  O8 Y) L
; E' v+ ]2 S: q: t1 M! Y流式做了两次了，一样的结果，试剂也用了两种，单色用了一次，又用了一次三色CD3+CD16+CD56，结果都一样，应该和试剂没有关系的
作者: mengnancy    时间: 2012-5-25 13:11

流式检测没有问题吧，CD3都会那么高吗？我做的CD3的阳性率为66%,CD3\CD56双阳性的占29%，怎么提高双阳性的百分比？加大细胞因子用量，培养的方法等各方面在探索中。
作者: LL87    时间: 2012-5-29 08:16

回复 mengnancy 的帖子; T" g6 j1 o2 \' i+ h9 V4 [4 n
( ?% a" P( B$ Q, }/ D1 d' F8 \, W
你的双阳蛮高的哦，我现在就希望能达到你那么高就好了
作者: mengnancy    时间: 2012-5-29 08:25

回复 LL87 的帖子) s- O  n7 ~2 T' s& v( O

0 k7 J0 u) F3 r- \0 E) j# |, ~* S但是增殖的比较慢，寻找原因中。
作者: liutianhua    时间: 2012-6-12 18:19

本帖最后由 细胞海洋 于 2012-6-13 00:43 编辑 3 ], i7 L( o4 P& L
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回复 LL87 的帖子
1 c, ?7 I0 t1 u8 o$ N) n8 F" H6 x, t! Y9 Q5 L$ L; _( R! `
楼主有流式的图吗？PS：楼主用的什么培养基，培养基的重要性远超因子，cik叫细胞因子诱导的杀伤细胞，cd3+cd56+是诱导出来的NKT样细胞（注：不是NKT），所以要想表型好，不能仅仅是扩增，还要有诱导的因素在里面。
作者: lyj-0017    时间: 2012-6-29 15:45

建议有流式图最好发一下流式图和原始数据（如果不涉及保密的话），这样大家也可以帮忙做一下数据分析。个人认为，想要细胞表型数据好一些，细胞培养以及诱导固然重要，流式数据分析（包括荧光补偿调节）也是一个很重要的因素。
作者: lyd20042004    时间: 2012-7-30 14:20

花饶然 发表于 2012-5-24 08:51
- ?+ [7 u/ J& S0 J4 N' g  C我做外周血时也遇到过，双阳性表达率很低，请问何故，也有人说双阳性细胞并不绝对影响治疗效果，是这样吗， ...

1 z; T* ]. s) H! A% q" X/ J排除其它原因，表型与培养基有很大关系，AIM-V和T551都很低，
作者: lyd20042004    时间: 2012-7-30 14:21

LL87 发表于 2012-5-23 17:22 ; y6 s+ l5 T* b6 B2 N! _
急急急！！养的脐血CIK细胞十三天了，做流式细胞仪检测，CD3表达阳性率达93%，而CD56表达在培养10几天后只有 ...
' }" F. n; q0 \- T/ T2 G( h/ `8 X
活化的不好
作者: mengnancy    时间: 2012-8-6 20:17

回复 lyd20042004 的帖子( q+ d: q3 Q5 P$ C+ m# _
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那用什么培养基，双阳性能提高呢？如果IL-2提高浓度，能使CD3CD56双阳性百分比提高吗？
作者: mengnancy    时间: 2012-8-6 20:18

回复 LL87 的帖子
1 p5 R$ A: Q* ?; n& I+ u
0 t- O) ~( Y& o: B6 h- p如果IL-2提高浓度，能使CD3CD56双阳性百分比提高吗？
作者: mengnancy    时间: 2012-8-6 20:19

回复 LL87 的帖子0 n6 _, t) X, B

, {  N% j/ _2 n) E1 l  \我也遇到同样问题了，求解
作者: lyd20042004    时间: 2012-8-6 23:29

mengnancy 发表于 2012-8-6 20:18 8 C! T) B9 b% {. k3 e
回复 LL87 的帖子6 K$ `# G: H# j! M9 y" K: I

$ Q; N0 p8 y' l, r4 x+ B如果IL-2提高浓度，能使CD3CD56双阳性百分比提高吗？

2 e) {+ \5 U! ]IL-2不可能提高比例
作者: mengnancy    时间: 2012-8-7 09:06

回复 lyd20042004 的帖子+ o  s: a4 D: G1 y# P
1 }. ^' e5 T/ S# }  z
请问怎么能使CD3CD56双阳性细胞百分比提高呢？
作者: lyd20042004    时间: 2012-8-8 20:56

mengnancy 发表于 2012-8-7 09:06
) f/ ^; \3 p5 k) b' U, N. I回复 lyd20042004 的帖子
* y: P0 R5 A2 d4 p) {8 z+ s
1 {, W. Q" T" n3 a9 j9 R& @2 S请问怎么能使CD3CD56双阳性细胞百分比提高呢？

. ?+ I$ I4 d9 w5 |您能够做到多少呢
作者: liutianhua    时间: 2012-8-15 10:19

回复 LL87 的帖子, d: C; G5 F& q0 Q7 k

8 [. t4 H0 w( Q+ l0 c这个双阳比例和很多因素有关，第一要检查流式工艺以及上机后的操作有没有问题，第二是和培养基关系最密切。
作者: liutianhua    时间: 2012-8-15 10:20

回复 花饶然 的帖子
  y+ l' i6 U' R5 {1 W
. v2 X# {& H' G* K  h你用的是什么培养基？



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