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标题: 求助原代大鼠骨髓间充质干细胞生长不均匀的问题 [打印本页]

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作者: orchard    时间: 2012-5-31 20:08     标题: 求助原代大鼠骨髓间充质干细胞生长不均匀的问题

我培养的原代大鼠骨髓间充质干细胞已传至第二代，之前细胞状态一直都很好，这一次不知道是什么原因生长没有以前均匀了，有的地方很密集，细胞是长梭形，看起来状态不错；有的地方比较疏松，细胞看起来有点肥大。请教大家这是什么原因造成的呢？我现在是应该继续换液观察？还是原瓶打散？还是几瓶汇合？还是有什么更好的办法？0 H& s- l. N/ t& F
由于是第一次养原代细胞，缺乏经验，还望各位前辈多多指教，谢谢啦！

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作者: shizhu198511    时间: 2012-5-31 21:29

原代生长肯定不均匀了，它是以集落生长的，有的地方就是密度大些，看情况如果细胞密度高的话，不要等长满，大概80%就直接传带了，穿戴以后细胞就均匀了

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作者: shizhu198511    时间: 2012-5-31 21:29

原代生长肯定不均匀了，它是以集落生长的，有的地方就是密度大些，看情况如果细胞密度高的话，不要等长满，大概80%就直接传带了，穿戴以后细胞就均匀了

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作者: 天枰2012    时间: 2012-6-1 09:02

楼上说的很有道理，如果细胞数量多可以等到传代，如果少可以消化了重新接种，或者像你说的几瓶合种！

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作者: orchard    时间: 2012-6-1 10:03

shizhu198511 发表于 2012-5-31 21:29 8 G# d8 }; E  q2 Z9 I; S
原代生长肯定不均匀了，它是以集落生长的，有的地方就是密度大些，看情况如果细胞密度高的话，不要等长满， ...

% C8 I/ h3 D9 G! |我之前已经传过两次了，请问大概到第几代的时候才会长均匀呢？是不是一定要生长均匀的细胞才能用于正式的实验？

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作者: orchard    时间: 2012-6-1 10:04

回复 天枰2012 的帖子
# `) y2 P  Z6 W' m1 ^) u* Y, x+ d+ ~
请问你有过重新接种或者几瓶汇合的经验吗？我就担心细胞反复消化会影响它的性能

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作者: 如来的观音    时间: 2012-6-1 13:19

生长不均匀是因为传代后再次接种时候铺散不均，每次放入孵箱之前，水平小幅度晃动3次，垂直晃动3次，尽量保持培养皿的每个角落都铺上细胞，大鼠MSC总体呈梭形和扁平形两种状态，密度小时多数呈扁平状，密度大时呈梭形。

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作者: ontheway_hit    时间: 2012-6-1 13:52

生长不均匀是因为你的培养瓶没有放水平吧，; c- n3 l, D9 E: p
你可以检查一下是不是培养箱里的板子不平，培养液往一个方向倾斜造成的，之前我们有过这样的例子。

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作者: ontheway_hit    时间: 2012-6-1 13:54

原代长得很好，而第二代长得不好，我觉得肯定是你操作的原因，或者是上面说的培养瓶不平，或者是种细胞时没铺平。

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作者: shizhu198511    时间: 2012-6-1 17:46

orchard 发表于 2012-6-1 10:03
) r8 m, z8 Y6 V$ N& r我之前已经传过两次了，请问大概到第几代的时候才会长均匀呢？是不是一定要生长均匀的细胞才能用于正式的 ...

5 ~  d& g; t, C' H
原来你这算P3代了吧，可能你消化过程有问题吧，要先用PBS洗2次后再加胰酶消化，消化后要吹打均匀，最好是单细胞状态，然后装入培养瓶时最好前后，左右均要摇晃一下，一般不会不均匀呀

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作者: Tim    时间: 2012-6-1 17:55

回复 orchard 的帖子
, ~2 a  r/ d+ \5 i# o4 T1 n# u
& L5 a9 j2 U3 t) J7 a7 n- j我前几天也遇到了消化完加培养液直接养！记得打散啊!

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作者: orchard    时间: 2012-6-1 21:57

回复 如来的观音 的帖子
) j& r9 c* a; @5 A3 ^5 }/ k4 p& f8 u1 f: J$ E
垂直向也要晃动啊？

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作者: orchard    时间: 2012-6-1 21:58

回复 ontheway_hit 的帖子6 Z) v5 ^  }$ U# C6 t. U
5 \9 I) c& @% D0 y' }5 [, }8 b  R
多谢提醒，我们的培养箱应该还好，因为没听说别人的细胞有类似的情况，可能还是我的问题吧

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作者: haibara007007    时间: 2012-6-1 21:58

我估计还是你传代时细胞接种不均匀，造成细胞浓度不一，所以有些地方密集，有些稀松，最好消化后重新接种，记得接种后摇晃不要过于剧烈，造成气泡，气泡部分就不会有细胞

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作者: orchard    时间: 2012-6-1 22:02

回复 shizhu198511 的帖子
2 r9 e' Q$ D6 I
% L. l7 T$ w7 c  X  s' ?! U: Q& w7 T嗯 我再重新打散一遍 多谢啦

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作者: orchard    时间: 2012-6-1 22:04

回复 Tim 的帖子* p" G" E8 m# V; Q- B) i

; |& u; A9 J4 T& Q' g打散打散 记住啦

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作者: orchard    时间: 2012-6-1 22:04

回复 haibara007007 的帖子
; _' r4 w" r3 t
( {$ J% @$ q. I# z% X. ?嗯 我已经打算打算重新接种了 多谢指教

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作者: 天枰2012    时间: 2012-6-2 11:12

回复 orchard 的帖子1 G5 e; N+ [4 b1 L; H
! h8 B6 p# l, r' f; `
有过，我们的原代也很少，所以经常这样做，从生长情况来看，没有多大的影响

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作者: guowang0224    时间: 2012-6-3 15:48

其实就是传代不均的问题

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作者: amberma    时间: 2012-6-4 09:58

回复 如来的观音 的帖子: V' u- _' t' U: Y* ?( ?9 y

/ \' d- t; g( N5 L0 Y9 ]我之前复苏了管P4的BMSC到六孔板，每个孔都是一半梭形一半圆形，中间还有很明显的界限。请问你遇到过吗 这种状态正常吗？

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作者: 如来的观音    时间: 2012-6-4 10:16

回复 amberma 的帖子
: y- O3 \2 K4 w" l
# E2 l# ~! |( I1 `. m什么叫很明显的界限，难道说以一条线为界，左边是索性的，右边是扁的？

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作者: amberma    时间: 2012-6-4 10:32

回复 如来的观音 的帖子9 u' ?+ t6 M: G4 o% x, q

, E# x! ]) R! |# V7 I0 f* W- f是的 左边都是梭形，右边都是扁的

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作者: 如来的观音    时间: 2012-6-4 12:56

amberma 发表于 2012-6-4 10:32 : V3 e+ x- [/ X. `
回复 如来的观音 的帖子
* D( U6 o! V/ l6 W. G1 v
3 T0 y2 {. K9 C" Z. f9 U" g是的 左边都是梭形，右边都是扁的

, C0 V3 ]5 C3 ?. q: [那我的还至于分边的这么规律。就是扁圆的旁边夹杂索性的，梭形之中夹杂扁圆的。

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作者: uknowzx    时间: 2012-6-4 14:00

可能就是没有摇匀的问题吧~

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作者: orchard    时间: 2012-6-6 09:01

amberma 发表于 2012-6-4 10:32 , V& @' {7 {, N5 Y% {3 M/ |3 {' N
回复 如来的观音 的帖子- W$ r7 |( D; ?$ H
. E( f8 R$ J; D* x6 v" z
是的 左边都是梭形，右边都是扁的

: `9 u& L2 D% J" h! v+ C
左右分界这么明显吗？建议你传张图片上来看看

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作者: amberma    时间: 2012-6-6 09:02

回复 如来的观音 的帖子& v3 W& A* L/ B, I3 o# l$ A

  A" H0 L0 r' N5 ~2 M) e( r上个图 BMSC P5
( ^) b+ k9 h* H2 n. {[attach]43018[/attach]
) k7 w7 ^* U( `5 e

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作者: 如来的观音    时间: 2012-6-6 11:06

回复 amberma 的帖子: m6 }" d3 T3 a' i1 V

, O4 j1 w/ t, M" ~4 g) t+ l$ g真不确定你这还是不是MSC，要是的话，活性也应该不好了。

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