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标题: 大家看看我的大鼠的MSC怎么了，有第3-7天的图 [打印本页]

作者: bnm789 时间: 2012-6-2 08:07 标题: 大家看看我的大鼠的MSC怎么了，有第3-7天的图

本帖最后由 bnm789 于 2012-6-2 08:15 编辑

80g左右大鼠，全骨髓培养分到3个25的瓶中， DMEM/F12 +10%FBS ，72小时后换液

作者: lxm5668 时间: 2012-6-2 08:26

状态不是太好，有一些萎缩凋亡了。看看这批培养基有问题没，血清比例加的对否？另外细胞密度不能传的太低。

作者: wcfeng88 时间: 2012-6-2 08:49

这细胞太稀了，很难长起来的，可以加大血清比例到20%培养一下。有条件的话，可以重新培养原代细胞，就放一个25得了，放3个太稀了。

作者: yongchen1314 时间: 2012-6-5 22:27

同意楼上的观点，原代细胞密度要稍微种密些，实际上是有密度要求的

作者: luoziwei 时间: 2012-6-5 22:52

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80g的大鼠分装3个T-25瓶子？不能着急啊，一般都是200g大鼠只做一个10cm的dish0 S0 ]4 v% m# \ k! [' _) X" Z4 W

作者: daytoday 时间: 2012-6-6 02:59

原代太稀，* v0 o1 C) C3 ~, a, ~ p' S/ R. F8 I
培养基我们一般采用低糖的DMEM，额外再加点谷氨酰胺，血清用最好的胚胎干细胞的血清

作者: hygene 时间: 2012-6-6 08:29

细胞接种密度过低，提高FBS浓度到15%，再养几天细胞也能够长好的。

作者: xiaojunhu1985 时间: 2012-6-6 17:29

接种密度有点低。

作者: bnm789 时间: 2012-6-6 20:09

本帖最后由 bnm789 于 2012-6-6 20:13 编辑
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请看看我这次第三天的MSC怎么样，那些挤到一块是不是MSC吗？

作者: bnm789 时间: 2012-6-6 20:16

本帖最后由 bnm789 于 2012-6-6 20:19 编辑 4 g5 P: p: s G0 ~( ]
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上次原代第11天的照片，没有立体感，也没长成流线型，请问各位这是MSC吗？

作者: doctor8848 时间: 2012-6-7 13:54

系统看了你的照片，从开始能看到少量MSCs （形态呈现为长菱形2-4突触爬开在皿底的细胞），但混在的其他细胞（死细胞，非MSC细胞）比例较高，到11天时，MSCs增殖不少，且混在细胞（圆形色深）比例明显减少，和多次换液有关，那些色浅，长菱形2-4突触爬开细胞几乎全是MSC，我们用的是cell line，形态就是这样的

作者: luoziwei 时间: 2012-6-7 14:30

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可以的，比上次的细胞要好

作者: bnm789 时间: 2012-6-7 22:29

回复 luoziwei 的帖子* e1 v2 o; E" V
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请问您看了我那11天的细胞照片没为什么细胞立体感不强别人也给我了些MSC，细胞个头瘦，立体感强，界限清楚，我那11天的是不是MSC啊？谢了

作者: 欣雨1121 时间: 2012-6-8 09:29

应该是啊但是状态有些差劲啊

作者: luoziwei 时间: 2012-6-8 12:51

回复 bnm789 的帖子% r2 V( J1 Q# o) ~
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看了，首先，你的照片没有聚焦在贴壁的细胞上，而是聚焦在悬浮的那些血细胞或者死细胞，看不太清楚。从细胞的轮廓来看，好像有些细小梭形的，但原代的就成扁平状的细胞基本不是我们想要的。

作者: luoziwei 时间: 2012-6-8 12:52

回复 bnm789 的帖子7 B3 N. @3 d1 A% \' v2 z9 @
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看了，首先，你的照片没有聚焦在贴壁的细胞上，而是聚焦在悬浮的那些血细胞或者死细胞，看不太清楚。从细胞的轮廓来看，好像有些细小梭形的，但原代的就成扁平状的细胞基本不是我们想要的。

作者: yanwu_1 时间: 2012-6-8 13:15

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我们以前用dmem培养间充质，有时候细胞形态会很不好，跟图中一样，细胞铺开，形态变大，没有立体感，后来换用专门的间充质培养基才得到改善。如果想做实验的话，建议你买一瓶专门的间充质培养基。

作者: doctor8848 时间: 2012-6-8 17:11

我个人觉得，立体感强是因为细胞分裂生长速度快，没有足够的时间空间让细胞充分贴壁，反而分裂生长速度慢的细胞，有足够的时间空间让细胞爬开，才会出现“扁平状”，我个人培养MSC经验，培养液血清浓度高，或是种植密度不足导致的细胞分裂生长缓慢，都会导致尽早的出现“扁平状”，我们用的cell line，double time 一般为2天左右，这个分裂生长速度可以保持较好的“立体感”

作者: bnm789 时间: 2012-6-8 19:09

谢谢楼上各位

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