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标题: 谁能赐教一下细胞铺板的窍门 [打印本页]

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作者: 上官冰梦    时间: 2012-6-2 12:31     标题: 谁能赐教一下细胞铺板的窍门

请高手谈谈铺24孔板铺的均匀的方法！多谢了！

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作者: wagumaxida    时间: 2012-6-2 12:42

上官冰梦 发表于 2012-6-2 12:31
9 W+ S& k. n7 o/ K1 g6 Z5 b' x请高手谈谈铺24孔板铺的均匀的方法！多谢了！

3 _+ f8 K8 j. b  r6 V$ ^3 {
先混匀再铺板 铺完不用吹打 以免吹打不匀 轻拿轻放 避免剧烈晃动导致外溢或者细胞集中于中间

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作者: 上官冰梦    时间: 2012-6-2 12:44

回复 wagumaxida 的帖子
  C% w) n+ S! A  p! D) O5 P! k- T5 \! {
那请问您一般每孔加多少细胞多少培养基呢？我用了各种方法可还是不匀，都要铺崩溃了！望赐教
+ h5 `  {; T/ _

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作者: wagumaxida    时间: 2012-6-2 20:39


5 z* e  _, m% A) x3 K

上官冰梦 发表于 2012-6-2 12:44 7 A6 d0 h6 W! f3 H
回复 wagumaxida 的帖子
8 S5 R& l7 s3 k, g
  w- E( T8 U' D, g4 i那请问您一般每孔加多少细胞多少培养基呢？我用了各种方法可还是不匀，都要铺崩溃 ...

/ P7 c+ v; V: D
$ y: U1 c9 k; [1 t( x一般来讲 24孔板我们加1-1.5ml，它的底面积一般是2平方厘米，细胞数目一般加1-3×10^5个，祝你成功

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作者: cochongg    时间: 2012-6-2 21:19

其实大家都有这样的经历，细胞在中心受到的冲击力最小，沉降过程中，中心沉淀最稳定，/ E6 b2 T6 a$ m2 K
，四周的细胞由于培养基液体在培养板（圆形）边缘效应影响，形状就像漩涡，中间凹陷，边缘液体高于中心。
$ D# Q' g1 W' T" ]% Q, I( H细胞都往中间聚拢。
( W5 ]" s+ }( H$ k# p, {
# [( x6 E2 z8 P7 A9 `2 C所以吹散的细胞悬液，加到板上，前后摇晃数下就放培养箱，就是我我们一般的做法，# v4 P/ Y. B4 \+ D" h
其实也没有什么办法。
, q" ^9 a8 j( r9 H我们能做的就是：尽量均匀，定时换液，保证培养基营养充足。" @& \2 P( O  \. A9 \* X6 O
适时传代，别样细胞长过。
5 L0 k* Y, f# O; F, [, }& ^. `9 Y% H只要细胞状态好就ok了+ H' ?: J/ r/ R! `9 C

3 r# K' `1 e/ i% p1 k消除边缘效应，可以液面加油，但是这样养细胞是行不通的

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作者: 上官冰梦    时间: 2012-6-2 21:29

回复 wagumaxida 的帖子
, \  w+ C% n* Z* e$ t9 T6 I$ _" W6 X* x, n
谢谢您 您也好运

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作者: 上官冰梦    时间: 2012-6-2 21:32

回复 cochongg 的帖子, J3 s* [  r5 ?3 D

' a& j- L  c: _/ \多谢

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作者: linzi214    时间: 2012-6-4 06:09

制备成细胞悬液加到培养皿中，现在外面放置几分钟等细胞差不多贴壁时再放进培养箱，这样细胞贴壁比较均匀，不会导致中部细胞密度过高

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作者: myboluo    时间: 2012-6-4 14:30

关键是用十字交叉晃动保证平均（此法对6孔板效果最好，24孔边缘效应太严重，需要晃动次数比较多）
" Z" {7 h4 a. W; @4 L" n& ]细胞悬液混匀是必须的，24孔板用1ml培养基，一个孔长满贴壁的肿瘤细胞数约为2.5x10^5左右。
( M# F5 k/ L4 j& p, x十字交叉晃动就是，加入细胞悬液后，前后晃动20~30次，停30s，再左右晃动20~30次，平放3~5min，轻轻移入培养箱。晃动幅度尽量大，只要液体洒不出来……

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作者: 溜圆    时间: 2012-7-29 22:20

我都是先在24孔板内加入0.5ml左右的培养基，然后再悬空加入细胞悬液，这样减轻液体表面张力的作用，我觉得铺的还可以，必要的时候可以再吹打几下。加完后在台子上放一会再放进培养箱里去。

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