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标题: siRNA连接何种载体转染大鼠骨髓间充质干细胞？ [打印本页]

作者: orchard 时间: 2012-6-6 09:00 标题: siRNA连接何种载体转染大鼠骨髓间充质干细胞？

我最近想做大鼠骨髓间充质干细胞中的两个目的基因的沉默，同时还想做体内实验，但是分子生物学这块刚刚接触，有很多不懂的地方向大家请教。如果想选用RNA干扰的慢病毒载体做稳定转染，请问大家都有用过什么载体呢？

作者: 燕北飞 时间: 2012-6-7 00:19

GV 慢病毒载体系列、pHelper 1.0 载体和 pHelper 2.0 载体三种常用质粒。

作者: 刘森泉 时间: 2012-6-7 08:49

回复燕北飞的帖子5 y( D1 l5 T1 _ r& s
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请教下，做过表达的慢病毒表达载体和siRNA敲降的的慢病毒载体是一样的么？如果不是，两者差什么？

作者: zack 时间: 2012-6-7 08:56

刘森泉发表于 2012-6-7 08:49 5 p4 D; }2 P$ `+ g, u+ I2 A- M
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可以用同样的慢病毒辅助质粒去包装。

作者: 刘森泉 时间: 2012-6-7 11:53

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辅助质粒共用是可以的，我意思是构建表达质粒的载体，对于高表达的和siRNA敲降的是否一样。谢谢！

作者: 燕北飞 时间: 2012-6-7 14:30

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不一样，高表达的载体要选择好的质粒，对启动子的要求很高，如果想让过表达效果明显，需要包装腺病毒或者AAV。

作者: 刘森泉 时间: 2012-6-7 17:50

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那可以用过表达的载体来构建siRNA的表达质粒？

作者: 燕北飞 时间: 2012-6-7 21:33

回复刘森泉的帖子3 ?" ?3 c0 g9 F' {
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如果质粒效果好的话，大家就不用包病毒了。

作者: 燕北飞 时间: 2012-6-7 21:39

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关于质粒和病毒的分类和功能，我这里就不想多说了，病毒转染干细胞专区会提供给你很好的解释。

作者: orchard 时间: 2012-6-8 20:10

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请问你们一般是自己构建还是找公司做呢？如果找公司的话哪家比较好？谢谢！

作者: 燕北飞 时间: 2012-6-10 20:02

回复 orchard 的帖子 Q5 s8 N2 F t& l* f! [# P
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我们实验室以包病毒为特长，因此我们是自己做的。

作者: sbsongguangqi 时间: 2012-6-20 02:35

我建议用质粒~~~ 用病毒表达量太大毒性大~ 需要优化msc的培养条件~

作者: yaolei1984 时间: 2012-6-20 13:13

我们一般公司做的慢病毒

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