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标题: 筛选出来的肿瘤干细胞可以稳定的培养吗？比如冻存、传代等 [打印本页]

作者: shixiangguang 时间: 2012-6-7 08:40 标题: 筛选出来的肿瘤干细胞可以稳定的培养吗？比如冻存、传代等

本帖最后由细胞海洋于 2012-6-7 08:53 编辑 " n( ?+ I/ g" F% G0 e
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筛选出来的肿瘤干细胞可以稳定的培养吗？比如冻存、传代等，还有哪种筛选方法不会影响细胞的活性?一般来讲，从一株肿瘤细胞中筛出肿瘤干细胞需要多长时间？代价高吗？烦请各位高手前辈帮忙解答啊

作者: shewawa 时间: 2012-6-7 18:06

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既然是肿瘤干细胞应该可以冻存传代，但是不知道能不能保留干细胞稳定的特性。分离干细胞应该要花很长时间吧，你要用抗体进行筛选，用ARIA进行sorting，这个估计筛选依稀是要很多小时的。我们做过这个实验，但是我看见旁边的同学做这个筛选，都是早上开始染抗体，做到晚上才拿着细胞回来。。。

作者: jack0811 时间: 2012-6-7 21:48

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直标抗体就好啦,很快出来的,加上sorting应该不用那么久吧

作者: shixiangguang 时间: 2012-6-8 08:34

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用ARIA进行sorting是啥技术？我想做这个方面的，由于我们实验室没人做过，我想尝试一下呵呵所以有很多不懂得，希望你多给我讲解一些好吗

作者: 新疆八钢 时间: 2012-6-8 09:21

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分选出来的肿瘤干细胞可以冻存传代，但是不能保留细胞的干性。一般分选后的CSCs应该立即实验，CSCs可以通过不对称分裂，分裂出nCSCs。分离CSCs的时间和你需要的细胞系CSCs的含量和分选条件有关，SP分选时间较长一点，Marker分选法时间相对较短。 4 M- x% {& V2 G2 I( f" k

作者: shewawa 时间: 2012-6-8 10:11

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对不起没有说清楚，说的是BD Biosciences FACSAria分选细胞，实验原理和普通的流式细胞仪差不多。不用这个机器，可能用MACS beads也可以进行分选。这个实验我没做过，所以没什么经验，等有机会做一下。下面的那位新疆同学，估计经验丰富，你可以向他请教。

作者: shixiangguang 时间: 2012-6-9 10:10

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哈哈，谢谢你的点拨

作者: shixiangguang 时间: 2012-6-9 10:19

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那CSC无法建立稳定的细胞系的情况下，每次实验岂不是都要重新筛？重新证实其干性？再说每次筛出来的肯定不尽相同。。。。这工作量太可怕了。。。您们一般筛CSC是从组织还是细胞系？需要多久才能筛出来？

作者: 新疆八钢 时间: 2012-6-10 20:14

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一般情况下如果进行干细胞生物学实验，每次实验最好都要分选新的CSCs，当然分选条件必须一致，这样可以不用每次都验证干性。干细胞课题目前最大的障碍就是工作量大，需要的细胞数量很多。我们从新鲜组织和细胞系中都筛选和分选出CSCs，一般从预实验到正式实验需要3月左右，不包括CSCs的生物学实验时间。

作者: shixiangguang 时间: 2012-6-11 09:14

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哦我晓得了，谢谢，据我所知现在做CSC的回报不是很大，投入产出失调，高分文章不是很多，有的人按照几种分子MARKER就说其是干细胞了，然后做下游实验，而这些作为干细胞的MARKER又不断的有人进行质疑和推翻。。。个人感觉很混乱

作者: hub12333 时间: 2012-6-11 22:41

1.现在用marker 分选的所谓干细胞并不都是干细胞，只能说是富集了干细胞；2.一般分选流式分选出来的所谓干细胞在普通培养基下会进行分对称分化的，进行干细胞实验都要重新分选，用marker 分选看你要分选的细胞数目，如果在10的6次方，需要2个小时左右，加上前面的细胞准备，抗体时间，一共需要4个小时左右。3.你用的什么细胞株？或者原代？，在没有进行鉴定前，是不能说你的分的细胞是干细胞的。如果有已知marker可以分选干细胞就可以不用自己进一步鉴定了，常见的肿瘤干细胞marker，在乳腺癌，胶质瘤，胃癌等有文献报道。

作者: shixiangguang 时间: 2012-6-12 08:56

我这里有几点想说：1、你分选出来是所谓干细胞将其诱导分化的时候，它们分化成了什么细胞？2、我现在打算先用细胞株看看，以后再做组织和原代，听说原代很难养的活，我做的是肺癌干细胞，3、得到了stem-like细胞后你进行哪些方面的下游实验? 4、我暑假后就研二了，研三要找工作，这工作量似乎很大呀怕是完成不了，求给点建议，，，

作者: xiulingcq 时间: 2012-6-12 09:27

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我也是刚起步做肺癌干细胞，不过不涉及到诱导分化。我认为诱导分化以后的细胞是不定的，所以肯能要再次用marker来验证。一直在做细胞系，没做组织和原代以前实验室有的人做的原代，做的是博士论文所以这个可能是需要很多时间吧。我也新手，多多交流啊

作者: cocoslee 时间: 2012-6-12 11:25

本帖最后由 cocoslee 于 2012-6-12 11:25 编辑 8 a. @' A0 h9 O0 O; }3 @9 s
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有免疫磁珠分选方法，德国美天旎，时间上能快一点。可以用单个核细胞或细胞株分选出具有干细胞表型的细胞，组织的没做过，没法给意见，不好意思，然后上流式测。培养体系共用人间充质干细胞培养体系，分无血清培养体系和带血清培养体系。可以查文献看你培养的干细胞采用哪种培养体系？具体操作时间很长，你得反复摸索实验条件。待解决的问题就是分选的干细胞培养问题，关系到后续的实验。实验做的很郁闷

作者: 细胞海洋 时间: 2012-6-13 01:12

回复 shixiangguang 的帖子4 y2 X% x0 V& G

你回复谁就点击对方回复帖子中的回复按钮然后输入内容像我这样& H: J% n2 y+ o+ S3 T; G

否则他会看不到

作者: 细胞海洋 时间: 2012-6-13 01:12

回复 cocoslee 的帖子8 o o" |% Q8 y9 [: O) j& M$ N
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你回复谁就点击对方回复帖子中的回复按钮然后输入内容像我这样5 C x5 W$ J- B: V# a% s
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否则他会看不到

作者: 细胞海洋 时间: 2012-6-13 01:12

回复 hub12333 的帖子

你回复谁就点击对方回复帖子中的回复按钮然后输入内容像我这样- S* h {* i: z: Y
9 ^ H! J$ _# ]0 `; l+ q
否则他会看不到

作者: shixiangguang 时间: 2012-6-13 09:21

谢谢你们的解答，犹豫呀，看来我还得仔细思量

作者: cocoslee 时间: 2012-6-19 09:57

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哦，知道了，谢谢超级版主。辛苦了。(*^__^*)

作者: 难题1981 时间: 2012-7-23 21:42

回复 shixiangguang 的帖子# D1 H4 X( P6 K* N9 A
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我正在做这方面的，能赐教么？留个QQ

作者: shixiangguang 时间: 2012-7-30 16:04

回复难题1981 的帖子5 ?4 a% u0 h5 F, e

不好意思哈，我还没有做，老板对这个不感冒

作者: linhua188 时间: 2012-10-10 10:34

同样的课题，想到肿瘤干细胞就头疼啊，这个东西做起来太抽象了

作者: evial 时间: 2012-10-10 10:59

细胞干性是一个时间点的问题，所有细胞都会衰退，包括干细胞，你想每个人身上都有干细胞不管是良性还是恶性。但是人都要死的，干细胞也是要死亡的，没有永生的东西，细胞系能传代也是有限的也会衰老。所以大家为什么要去养那些细胞呢？短时间养一下是可以的，长时间养就不是原来那个状态的东西了，这就是人生哲学，细胞们也遵守这个哲学。BD的机器可以分选细胞，但最好的还是beckman moflo速度快更精确。分选细胞对我们来说已经不是啥问题了哈。

作者: lily132 时间: 2016-7-18 15:07

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“分选出来的肿瘤干细胞可以冻存传代，但是不能保留细胞的干性。” 那么冻存传代也没有意义了？

作者: anning111 时间: 2016-8-5 17:01

肿瘤干细胞有无血清培养基没？

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