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标题: 如何去除培养胚胎干细胞里面已经分化的细胞 [打印本页]

作者: Helena110 时间: 2012-6-12 00:57 标题: 如何去除培养胚胎干细胞里面已经分化的细胞

大家好！由于最近培养的细胞很多都分化了，在传代的过程中有没有好的方法可以把这些已经分化的细胞去除掉呢请赐教了多谢。

作者: dianying 时间: 2012-6-12 09:18

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先在显微镜下用 20ul tip 铲掉，吸干旧液，再换上新液，或传代或接着养。

作者: song58 时间: 2012-6-12 13:19

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镜下标记不要的克隆，200的枪头调到20，边挑边吸走不要的克隆，都挑完后拿DF12或PBS涮2～3次，换上新鲜培养基就OK了。

作者: YYQ6301 时间: 2012-6-18 10:40

学习了

作者: yangel 时间: 2012-6-18 10:47

如果是人的胚胎干细胞的话，可以直接挑传形态好的克隆。另外，有个粗暴的办法，dispase处理10min，好的克隆会圈边，轻轻一拍就下来了。分化的细胞克隆还贴的牢牢的。

作者: Helena110 时间: 2012-6-27 14:38

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3 k0 ^7 {2 \+ c" e; `6 J4 O" R" ~
谢谢

作者: Helena110 时间: 2012-6-27 14:38

回复 song58 的帖子$ e1 D" W- G# Y- X. d
: A& B! [# W5 e$ K5 @
谢谢

作者: Helena110 时间: 2012-6-27 14:39

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是不是分化了的细胞都消化的慢些呢

作者: Helena110 时间: 2012-6-27 14:39

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小鼠的ES是不是也是这样谢谢2 l) G: q \% w/ E) p* H; h* |

作者: redmaple 时间: 2012-7-5 19:25

你得看看你的干细胞和什么抗性基因相连，我们实验室用得细胞是nanog和抗puromycin基因在同一个阅读框架下，所以我们用puro筛选，分化的细胞nanog表达降低，puro 抗性降低，在高浓度的puro处理下，经过几代培养，分化的细胞就会杀死。你们的ES细胞是不是也是这样。

作者: ielisa 时间: 2012-7-10 15:43

显微镜下标注出你们认为分化的克隆，然后胶原酶消化10min，没有细胞刮其实用lml的枪头，或者塑料移液管尖端也是可以的，轻轻一刮就下来了。如果分化的克隆很多，建议挑出好的克隆，分化的克隆就不要了，或者做其他实验。分化的克隆边缘是不规则的，消化的话需要更长的时间才能消化下来，没有分化的克隆需要的时间短一些，可以利用这个把它们分开

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