干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: hiPS传代时的消化问题 [打印本页]

作者: 573639471 时间: 2012-6-21 16:19 标题: hiPS传代时的消化问题

今天传代用胶原酶消化30min后 feeder全晃下来了，iPS继续消化了20min也下不来 7 f" f ]5 F4 Y- |- S' h/ T- b
酶是刚配的sigma粉末 1mg/ml
怎么回事，大家遇到过吗

作者: 573639471 时间: 2012-6-21 16:30

回复 573639471 的帖子# K$ ^: _1 a( g# q( [
{- ?6 Q# G3 S! X: |
有图为证

作者: 开心果王 时间: 2012-6-21 17:49

貌似feeder有些密啊，看到你的克隆消化后都散掉了，这样传代效率不高把！可以不用消化这么久，看到有些卷边就可以用枪头刮下来了！

作者: wwy551 时间: 2012-6-21 20:49

消化确实太久了，这样对ips克隆不好，我们都很少等克隆自己脱落的，一般消化5到10分钟就可以用1ml的移液管刮克隆了

作者: fguw 时间: 2012-6-22 06:46

酶是刚配的sigma粉末 1mg/ml' ？, M9 W5 g z P9 M- o7 X
我觉得你配的有问题，你用PBS，还是DMEM/F12 配的？
不会是培养基吧？
应该用DMEM/F12

作者: wang3033 时间: 2012-6-22 07:12

feeder是用鼠尾胶原制备的，消化当然没有问题，IPS细胞团之间的连接不是靠胶原蛋白连接，所以细胞团散不开，其实你的胶原酶没有问题，而且消化已经过头了

作者: 白巧克力 时间: 2012-6-22 09:17

你的feeder layer好密啊... ... 我买的不是sigma的，不知道大家用的是不是都是；而且我发现，用没用完的collagenaseIV（用剩冻起来再化开用）消化会比新的慢些。

作者: 490096812 时间: 2012-6-22 09:29

我觉得可能是你的胰酶有问题，是不是有血清污染了啊

作者: BNJN 时间: 2012-6-22 11:38

我用的是Dispase，消化5min左右，再用枪吹下来。

作者: zmm 时间: 2012-6-22 13:23

回复 573639471 的帖子- R& F0 _- L8 y. y& A# o

我觉得你的feeder太密了，这样会导致你hips状态不好。依我看你那克隆大小不用传代，可以在培养两三天。消化的时间基本在5min就可以了。还有你这个是人源的feeder吧？

作者: stemcellmeng 时间: 2012-6-23 17:12

如果iPS消化的时间比较长还下不来，就有可能是分化了。

作者: 573639471 时间: 2012-6-24 08:49

回复 fguw 的帖子

用PBS配的

作者: 573639471 时间: 2012-6-24 08:50

回复 zmm 的帖子8 n( c: I k* Q+ ]: R- N1 s) L

iPS是人的，feeder 是鼠的

作者: 573639471 时间: 2012-6-24 08:50

回复 BNJN 的帖子
1 }8 G' }& B5 g; X0 n, r
不会吹散吗

作者: 573639471 时间: 2012-6-24 08:52

回复白巧克力的帖子
+ `% m, ? G. j( R, w
你买的是哪公司的？好用吗用DMEM/F12配的？

作者: BNJN 时间: 2012-6-25 08:56

Gibco的，我实验室的hiPS、hESC传代都用，5min后看见克隆边缘有卷起就行了

作者: 白巧克力 时间: 2012-6-26 08:42

回复 573639471 的帖子

Gibco的，具体与楼上BNJN相同。

作者: 573639471 时间: 2012-6-26 14:57

回复 fguw 的帖子$ C+ q* {, Y* _& k

配的有什么问题？除了不应该用PBS还有吗

作者: fguw 时间: 2012-6-27 15:35

比较标准的是，DMEM/F12（1：1）
因为基础培养基就是这个，1 Y( q2 o, W* k, ~ O+ w* ^* [! p
我们实验室做过实验，发现这个最好，

作者: 也行天下 时间: 2012-8-10 16:16

feeder太密了！iPS克隆中间的细胞好像已经有分化了吧，这可能也是iPS克隆消化不下来并且细胞较散的原因吧。% z v& w0 P4 L6 o+ H
我们用胶原酶消化一般40-50分钟至iPS克隆明显卷边，即使克隆完全消化下来了细胞也不会像图中的那样散。0 v( Z8 N: n z& h

作者: gexiaoyatou 时间: 2012-10-19 22:37

回复 BNJN 的帖子# m' t! X2 A6 V2 C8 B) L
: y3 J9 D2 j. i7 {
是哪个公司的dispace，可以推荐下吗？大体消化到什么程度呀？

作者: 第一心音 时间: 2012-10-20 13:45

建议直接挂下来

作者: jcb 时间: 2012-10-21 02:43

为啥不在胶上养。便宜很多。传代，dispase 比较好。消化六七分钟，洗三遍然后用玻璃移液管切成小片。4 A6 A ]3 i7 r4 g4 [- o0 C% Q

作者: fwj81 时间: 2013-1-21 16:58

饲养层好像密了点，我们用0.05的胰酶消化5分左右就好了，且传代生长很好呀，检查下是不是哪个环节出问题了

作者: Jonathan 时间: 2013-1-23 11:34

问题很多啊。1 feeder 太密，2 克隆形态太差 3 消化时间过度 4消化后是用枪头或者啥的刮下来

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)