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标题: 细胞培养时很多黑点，像碎片一样的东西，怎么解决 [打印本页]
作者: jiojoo    时间: 2012-6-22 09:50     标题: 细胞培养时很多黑点，像碎片一样的东西，怎么解决

本帖最后由 jiojoo 于 2012-6-22 09:53 编辑 # x  W. U: u# X4 V& @" R
: h7 P8 i' P- _
RT- G3 R$ t- Z" Z- i3 d4 C3 C1 q
看图，这些黑点是漂浮状态的，现在细胞还稀，如果密一点的话，就感觉培养基好脏一样，但是不是染菌
* ]5 V! G5 z4 m  U/ |* j( {0 t" b求大侠指点这是什么东西，怎么回事？: f- q; x" J- W9 e8 J: q3 m
培养基是Gibico进口液体的，血清是PAA的进口EU优胎（ATCC上说要热灭活，未做热灭活处理）, `+ X$ {3 s/ C0 ?; \$ k  K
0 N7 {2 O& |6 a  c  U% ~) l" [; F
Captured 10X 1.jpg : L- g3 E4 v! n. S# S
4 E8 K% a) S1 w
我用箭头标出来了，红色的就是我说的黑点和碎片
. s/ k' h( I; Y) X 1.jpg # `7 \8 X, R% P3 E. Q
另外，我还想问下黄色标出的黑点是核仁的什么东西？

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作者: wawj    时间: 2012-6-22 10:16

回复 jiojoo 的帖子# T* T! A; b$ [! |
7 s) e" J7 |8 p& R1 Y8 ?6 e6 f
这养的是什么细胞，第几代了？
作者: jiojoo    时间: 2012-6-22 10:26

回复 wawj 的帖子
* O; x/ l& z2 Z& L* c0 W- Y! M
, _! K% j9 |2 r, @C3H10T细胞株，多少代没大关系，也不知道是多少代，刚从中科院买的
作者: wawj    时间: 2012-6-22 10:34

回复 jiojoo 的帖子
, ^+ q! p8 Q" }0 ^5 u
- N" F: o- ?- ]( }2 ]$ [0 [! E刚买的应该不会啊，像细胞老化了，核里有些空泡变性，细胞间那些黑点可能是细胞碎片，仅供参考。
作者: jiojoo    时间: 2012-6-22 10:46

回复 wawj 的帖子
- X! r5 S& x; y- H
% {- R# R7 |. ^谢谢: j0 r# j) |7 ]# B! N+ V7 g6 n
不仅是核里，胞质里也有很多空泡" }6 x: Q6 `. R! ^3 S) {4 z3 B
有空泡代表什么？
% a) E  A9 X. e3 n: p有细胞碎片又代表什么呢？
作者: 紫花地丁    时间: 2012-6-22 10:54

细胞碎片是死亡了的细胞，我觉得你这种像污染了~
作者: jiojoo    时间: 2012-6-22 11:03

回复 紫花地丁 的帖子5 t. L; B  f# a5 A- l% U; p4 M
/ L* N/ n: g5 H% q3 s4 }% |
何种污染？3 K8 t0 F  b/ a7 m( G+ A, |
细菌染不太可能，染菌还是比较好看的出来的
  z9 U$ {& P; B+ a/ V- v& z. g这些黑点虽然在漂，但不会动
作者: 不倒翁    时间: 2012-6-22 11:03

动么
) d$ ~/ o/ V; S
作者: 紫花地丁    时间: 2012-6-22 11:19

回复 jiojoo 的帖子
0 z9 z. N$ |5 i5 b8 [
& g8 n$ v+ a' v: z9 K不动的话就应该不是细菌污染了，但是旁边那些亮晶晶的是什么呢？我养的是内皮细胞，不是你这种。
作者: 大少爷    时间: 2012-6-22 12:15

貌似是培养基里面的吧，应该没事。
作者: sijicc    时间: 2012-6-22 12:31

我们使用无血清培养细胞的时候也出现了小黑点这种问题
0 I! m0 p9 U- u. M( e
# l& _' r& X& ~5 G我有几点看法和你分享3 }3 t! B" K0 u* f6 ^) d% u+ e2 M
1 不是污染，我们做了血培养，支原体，内毒素等多项检测均合格' ?7 N* {* A- |. ^! `# S
2 细胞形态不好的时候才会出现小黑点这种状况，在细胞活力和形态都很好的时候则无( k7 Q( r5 z- c9 V, W+ W( {: x0 Z
作者: jiojoo    时间: 2012-6-22 13:01

回复 紫花地丁 的帖子0 D* m5 X5 c" ]) [* E9 ^

/ X* L2 u9 ]; X/ \) i' _旁边那些亮晶晶的是正在分裂的细胞
作者: jiojoo    时间: 2012-6-22 13:02

回复 大少爷 的帖子; M5 d1 a% }' V( }1 G
+ Q" z* {% A* V9 x$ n* a. i
不是培养基里的，培养基很干净
作者: jiojoo    时间: 2012-6-22 13:03

回复 sijicc 的帖子/ _% v7 u# l+ ]8 c2 Q  R
4 O, H+ R* z& o) w" H
谢谢
8 p0 o! j; I& w3 r7 s那就是说，细胞活力出现了问题？
, Q$ {# u: ?( k( |血清会不会有问题？
作者: loyal    时间: 2012-6-22 14:30

细胞生长速度如何？如果比正常慢，检测一下是否有支原体污染
作者: jiojoo    时间: 2012-6-22 16:41

回复 loyal 的帖子3 |( [# D+ Z1 [. I& I

8 S) Y6 a- u; p' |4 [; h% q请问有没有比较简单便捷的支原体检测方法？
作者: pipi168    时间: 2012-6-22 22:21

细胞碎片，很明显，你才学培养细胞吧，养细胞和种菜一样，要时间长才有经验
作者: loyal    时间: 2012-6-23 09:42

回复 jiojoo 的帖子, J4 H' @" A. N! P5 V1 g: _

8 Z( A1 v% [& D$ f4 ~可以买个碧云天的支原体检测试剂盒或者貌似也可以通过PCR检测吧，你上网搜搜
作者: xbs530515    时间: 2012-6-23 11:46

即便不是污染的话，细胞应该也长不起来了，状态实在太差。有没有细胞密度大一点的照片？不过应该不是血清灭活的问题，一般情况下的细胞培养不需要进行热灭活的。可以考虑取上清来继续培养，看黑点会不会增殖，如要增殖的话，肯定就是污染，注意培养液里面要没有双抗才行。# Q% K5 q; B, t1 l9 C+ v; _
还有细胞的话，可以考虑将接种密度加大一点试试看，细胞状态有无好转
作者: jiojoo    时间: 2012-6-23 12:49

回复 pipi168 的帖子5 v, _7 `8 m+ u7 F: k! d! |

7 I: ]% ~" G8 [1 ~7 o' l请问为什么会有这么多细胞碎片？
1 p! H; `9 K. e+ \) N) t$ x! }细胞都死了？
. l# W. y/ i( T7 b刚换过液的培养瓶，很快（2h）又会有死细胞和这些碎片了
作者: jiojoo    时间: 2012-6-23 12:58

回复 xbs530515 的帖子
6 Y! V9 O0 n1 \6 w1 c, c" P8 A3 K. F9 k" W
基本确定是细胞碎片
. N( n" u( A" q' y' n: e细胞在不停增殖，但同时也不停地坏死，刚换过液2h又会有死细胞和这些碎片了
: y! ?3 X$ G4 Z/ O5 ~这要怎么办才好？- c4 D, e  r# q6 }, d) T/ O% @3 g
因为ATCC上说了这株细胞（C3H10T1/2）血清需要热灭活，会不会有很大关系？) U4 X9 g6 L0 J5 h2 Q9 l: b: w
另外，这株细胞说明上说对接触抑制很敏感，会不会因为寄过来时长的太满（挤到完全看不到形态）造成的？
! r. i7 O& z- J$ }( H2 `您那边有没有人养过C3H10T1/2这株细胞？
作者: scienese    时间: 2012-6-23 20:22

细胞老了，那些浮动的是细胞碎片，多洗几遍就没了，建议提高血清浓度，另外你指的黑点就是核仁啊周围那个大圈圈是细胞核，染核后那个点点比那个圆还要亮呢！你可以试试！
作者: duanduan48    时间: 2012-6-25 16:34

会不会是黑胶虫呢？( o# a4 P3 c, k. @7 g* I" M
楼主可以google or baidu 相关问题！
% f7 B, f$ n  K. N* x4 Z不过出现黑胶虫后比较难处理！
. H" o; e' E7 _, K' ~5 H
作者: 深海鱼    时间: 2012-6-25 16:55

细菌污染
作者: jiojoo    时间: 2012-6-25 17:52

回复 duanduan48 的帖子
, @6 N: v& ]5 o8 s$ `; r8 F2 I8 H" M& e3 @8 ^- l
应该不是，比较大，是细胞碎片5 m' ?- g: H- K
而且细胞长的很快，1：8基本上三天
作者: jiojoo    时间: 2012-6-25 17:52

回复 深海鱼 的帖子1 @1 Y. M, e/ E; `

/ |( N0 X. R7 k% @已经排除细菌污染的可能
作者: shqinzhu    时间: 2012-6-25 21:58

正常的。血清里面的。融化血清的时候最好不要37度，自常温或者4度融化。要不然就可能会有这种渣渣。
作者: shqinzhu    时间: 2012-6-25 21:58

正常的。血清里面的。融化血清的时候最好不要37度，自常温或者4度融化。要不然就可能会有这种渣渣。
作者: lyj-0017    时间: 2012-6-29 13:52

应该不是污染，细胞状态不是很好，另外一个原因可能是血清的问题，有些批次的血清处理不好可能会含有一些点点的东西，有的实验室将其称为黑蛟虫（不过貌似没人证明由此物）。实在不行就换个别的品牌的血清试试。
作者: momocy    时间: 2012-6-29 15:13

应该是支原体污染，你检测一下吧，我看这种，一般检测都是阳性的。
作者: momocy    时间: 2012-6-29 15:13

应该是支原体污染，你检测一下吧，我看这种，一般检测都是阳性的。
作者: JUAN0217    时间: 2012-6-29 15:22

细胞培养的时间过长就会出现这样的现象，以前养CIK的时候也发现过，培养基看起来很清亮，不像是污染。
作者: luoye1986    时间: 2012-6-29 15:37

我觉得是血清里面的杂质，因为在血清灭活后可以清晰看到好多杂质沉淀



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