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标题: 细胞培养时很多黑点，像碎片一样的东西，怎么解决 [打印本页]

作者: jiojoo 时间: 2012-6-22 09:50 标题: 细胞培养时很多黑点，像碎片一样的东西，怎么解决

本帖最后由 jiojoo 于 2012-6-22 09:53 编辑 " Z# ^5 ~7 I6 g$ h% M( q

RT% E x$ h9 h4 r3 e5 J2 t& `, S
看图，这些黑点是漂浮状态的，现在细胞还稀，如果密一点的话，就感觉培养基好脏一样，但是不是染菌; B7 K7 `* f9 G0 N; H5 U& k( A$ r, K' P
求大侠指点这是什么东西，怎么回事？. \6 C9 B9 C$ Q# b# K
培养基是Gibico进口液体的，血清是PAA的进口EU优胎（ATCC上说要热灭活，未做热灭活处理）

Captured 10X 1.jpg

; d+ u. j. J, f/ k$ Q

我用箭头标出来了，红色的就是我说的黑点和碎片- X. Z/ y" u( h" o! z- k

另外，我还想问下黄色标出的黑点是核仁的什么东西？

图片附件: Captured 10X 1.jpg (2012-6-22 09:45, 757.27 KB) / 下载次数 706
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作者: wawj 时间: 2012-6-22 10:16

回复 jiojoo 的帖子6 b: n+ x5 p2 A1 V9 D

这养的是什么细胞，第几代了？

作者: jiojoo 时间: 2012-6-22 10:26

回复 wawj 的帖子" M7 v' ]% f/ \; V: G

C3H10T细胞株，多少代没大关系，也不知道是多少代，刚从中科院买的

作者: wawj 时间: 2012-6-22 10:34

回复 jiojoo 的帖子
0 u( T1 p! _) W: _" L/ Q
刚买的应该不会啊，像细胞老化了，核里有些空泡变性，细胞间那些黑点可能是细胞碎片，仅供参考。

作者: jiojoo 时间: 2012-6-22 10:46

回复 wawj 的帖子

谢谢
不仅是核里，胞质里也有很多空泡% v& {+ {. z- |1 z& R. N% n
有空泡代表什么？ R: w4 W7 g8 n
有细胞碎片又代表什么呢？

作者: 紫花地丁 时间: 2012-6-22 10:54

细胞碎片是死亡了的细胞，我觉得你这种像污染了~

作者: jiojoo 时间: 2012-6-22 11:03

回复紫花地丁的帖子
: P/ V) b4 O; |6 ?
何种污染？
细菌染不太可能，染菌还是比较好看的出来的
这些黑点虽然在漂，但不会动

作者: 不倒翁 时间: 2012-6-22 11:03

动么

作者: 紫花地丁 时间: 2012-6-22 11:19

回复 jiojoo 的帖子
! f& Y, o) b) L$ J# Z' l( _4 s) Z
不动的话就应该不是细菌污染了，但是旁边那些亮晶晶的是什么呢？我养的是内皮细胞，不是你这种。

作者: 大少爷 时间: 2012-6-22 12:15

貌似是培养基里面的吧，应该没事。

作者: sijicc 时间: 2012-6-22 12:31

我们使用无血清培养细胞的时候也出现了小黑点这种问题
7 T0 q- \& n/ \- K4 {3 R2 w
我有几点看法和你分享
1 不是污染，我们做了血培养，支原体，内毒素等多项检测均合格
2 细胞形态不好的时候才会出现小黑点这种状况，在细胞活力和形态都很好的时候则无

作者: jiojoo 时间: 2012-6-22 13:01

回复紫花地丁的帖子

旁边那些亮晶晶的是正在分裂的细胞

作者: jiojoo 时间: 2012-6-22 13:02

回复大少爷的帖子8 @( d5 ?4 D7 a, |# ^+ @0 L
3 e Z7 { Z0 i9 C+ {! p
不是培养基里的，培养基很干净

作者: jiojoo 时间: 2012-6-22 13:03

回复 sijicc 的帖子

谢谢
那就是说，细胞活力出现了问题？9 ?2 J- a$ P% v. F2 F# N
血清会不会有问题？

作者: loyal 时间: 2012-6-22 14:30

细胞生长速度如何？如果比正常慢，检测一下是否有支原体污染

作者: jiojoo 时间: 2012-6-22 16:41

回复 loyal 的帖子

请问有没有比较简单便捷的支原体检测方法？

作者: pipi168 时间: 2012-6-22 22:21

细胞碎片，很明显，你才学培养细胞吧，养细胞和种菜一样，要时间长才有经验

作者: loyal 时间: 2012-6-23 09:42

回复 jiojoo 的帖子
1 {( d! O5 i! M2 G8 K
可以买个碧云天的支原体检测试剂盒或者貌似也可以通过PCR检测吧，你上网搜搜

作者: xbs530515 时间: 2012-6-23 11:46

即便不是污染的话，细胞应该也长不起来了，状态实在太差。有没有细胞密度大一点的照片？不过应该不是血清灭活的问题，一般情况下的细胞培养不需要进行热灭活的。可以考虑取上清来继续培养，看黑点会不会增殖，如要增殖的话，肯定就是污染，注意培养液里面要没有双抗才行。
还有细胞的话，可以考虑将接种密度加大一点试试看，细胞状态有无好转

作者: jiojoo 时间: 2012-6-23 12:49

回复 pipi168 的帖子+ b' Q$ `! u3 P4 u8 ^

请问为什么会有这么多细胞碎片？- E% L" c1 o Y+ u2 l" n: v
细胞都死了？: D0 _$ _) N/ K9 P2 o
刚换过液的培养瓶，很快（2h）又会有死细胞和这些碎片了

作者: jiojoo 时间: 2012-6-23 12:58

回复 xbs530515 的帖子: r3 }8 i) Q1 d3 q" K$ O" d" l5 {

基本确定是细胞碎片 @3 q/ G5 f/ E6 s
细胞在不停增殖，但同时也不停地坏死，刚换过液2h又会有死细胞和这些碎片了2 Z: r- l6 }) u, V
这要怎么办才好？) u3 o* i$ h6 x' R1 o: j- h3 _! q
因为ATCC上说了这株细胞（C3H10T1/2）血清需要热灭活，会不会有很大关系？# B# F! r! o @4 Z" a4 k+ p; L, |
另外，这株细胞说明上说对接触抑制很敏感，会不会因为寄过来时长的太满（挤到完全看不到形态）造成的？
您那边有没有人养过C3H10T1/2这株细胞？

作者: scienese 时间: 2012-6-23 20:22

细胞老了，那些浮动的是细胞碎片，多洗几遍就没了，建议提高血清浓度，另外你指的黑点就是核仁啊周围那个大圈圈是细胞核，染核后那个点点比那个圆还要亮呢！你可以试试！

作者: duanduan48 时间: 2012-6-25 16:34

会不会是黑胶虫呢？
楼主可以google or baidu 相关问题！
不过出现黑胶虫后比较难处理！

作者: 深海鱼 时间: 2012-6-25 16:55

细菌污染

作者: jiojoo 时间: 2012-6-25 17:52

回复 duanduan48 的帖子

应该不是，比较大，是细胞碎片
而且细胞长的很快，1：8基本上三天

作者: jiojoo 时间: 2012-6-25 17:52

回复深海鱼的帖子; j$ z8 W. t; ?& U9 |" R( L

已经排除细菌污染的可能

作者: shqinzhu 时间: 2012-6-25 21:58

正常的。血清里面的。融化血清的时候最好不要37度，自常温或者4度融化。要不然就可能会有这种渣渣。

作者: lyj-0017 时间: 2012-6-29 13:52

应该不是污染，细胞状态不是很好，另外一个原因可能是血清的问题，有些批次的血清处理不好可能会含有一些点点的东西，有的实验室将其称为黑蛟虫（不过貌似没人证明由此物）。实在不行就换个别的品牌的血清试试。

作者: momocy 时间: 2012-6-29 15:13

应该是支原体污染，你检测一下吧，我看这种，一般检测都是阳性的。

作者: JUAN0217 时间: 2012-6-29 15:22

细胞培养的时间过长就会出现这样的现象，以前养CIK的时候也发现过，培养基看起来很清亮，不像是污染。

作者: luoye1986 时间: 2012-6-29 15:37

我觉得是血清里面的杂质，因为在血清灭活后可以清晰看到好多杂质沉淀

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