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标题: 请教高手: IPS诱导? [打印本页]

作者: sammie 时间: 2012-6-25 11:44 标题: 请教高手: IPS诱导?

1. 为什么现在大家做IPS都倾向于用Yamanaka的四因子，而不是用Thomason的四个因子，不是说KLF4和C-MYC是癌基因吗？为什么不用NANOG和LIN28呢？' J& P! M3 m; l6 j
2. 用于诱导IPS的病毒是用逆转录病毒好呢还是用慢病毒好呢？？

作者: 晴朗 时间: 2012-6-26 12:46

今天在学校有幸听到James Thomason 的学生徐仁和教授的讲座，Yamanaka 的四个因子Oct4.Sox2、Klf4、c-Myc,和JJames Thomason的四个因子OCT4、SOX2、NANOG、LIN28差不多!最好的方法是：把他们都结合起来，即用六个因子一起培养：Oct4.Sox2、Klf4、c-Myc,、NANOG、LIN28。这个效果最好啦！

作者: daytoday 时间: 2012-6-27 04:44

我们现在用的是OCT4，SOX2和Nanog，效果一样好，文章年底面世:lol

作者: daytoday 时间: 2012-6-27 04:49

贴张未发表的图

; ]/ K' e6 {& Y2 T% ?

作者: daytoday 时间: 2012-6-27 04:51

回复 daytoday 的帖子/ `' Y! q4 d. l( o: |5 k

[attach]43638[/attach]

作者: 不倒翁 时间: 2012-6-27 08:37

逆转录病毒由于感染时细胞很稀而且MEF貌似很脆弱所有慢病毒感染细胞很容易死

作者: webber43 时间: 2012-6-27 11:00

回复 daytoday 的帖子' ]# F  T3 g5 k/ X  t& p+ c
! t+ h# m) Y+ p- D+ H. h2 z: q8 P  S
能透露一下阁下做的IPS效率有多高吗？, S/ O, T  j9 a5 V4 a

作者: gact 时间: 2012-6-29 09:15

回复 daytoday 的帖子* v) z3 F: _% F$ { y8 o6 p: A

这是96孔板？

作者: ghfvcat 时间: 2012-6-29 09:45

后面的一组，效率低，非常低

作者: daytoday 时间: 2012-7-2 04:00

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0 e5 n& s* k3 O7 Z- E
效率99%以上，用的是蛋白:lol

作者: daytoday 时间: 2012-7-2 04:01

回复 gact 的帖子
+ O: [9 }. m8 [
这是35mm的dish

作者: ghfvcat 时间: 2012-7-2 13:10

回复 daytoday 的帖子
. S7 b4 S) }2 o. P( h# n [
iPS诱导效率99%以上? are you joking?

作者: birdflubirdflu 时间: 2012-7-2 13:32

回复晴朗的帖子6 g+ l U ^6 C
8 ~3 Z7 n1 a# P H% q1 d0 v, M' N
能少用transcription factor还是少用了，毕竟大家都在优化，寻找一个最好的cocktail。

作者: daytoday 时间: 2012-7-3 02:21

回复 ghfvcat 的帖子; m1 S s8 @+ X( L8 O. w1 x: v

I'm dead serious

作者: birdflubirdflu 时间: 2012-7-3 09:34

回复 daytoday 的帖子+ w0 c4 C+ A9 e, _
. z* v( G9 |4 }# q
我明白。因为你算的是最终ips除以最初被诱导细胞的总数，而这个conversion的过程，细胞是增长的。有可能一个fibroblast诱导成了两个ips。很多group都是这样算conversion efficiency的，见怪不怪的，超过100%的conversion efficiency都有。

作者: ghfvcat 时间: 2012-7-3 17:08

回复 birdflubirdflu 的帖子

效率不应该是最后形成的克隆数目除以铺在feeder上的原始细胞的数目么，这个算什么效率？多让iPS长个两天，这个效率可以翻几番吧

作者: birdflubirdflu 时间: 2012-7-3 17:17

回复 ghfvcat 的帖子9 X F/ R I* F% X
9 o+ P! i# ^* B9 F. e0 b
你说的是正确的，但conversion的过程细胞会增长也是一个事实，重编程的完成时间点是人为定的，我们只是遵循计算的原则，所以克隆数目的多少在一定程度上也是可变的。

作者: daytoday 时间: 2012-7-5 10:35

我们是计数重编程之后ips细胞的阳性细胞数与最终总细胞数的比例
我们不使用feeder

作者: xiphias 时间: 2012-7-5 17:08

回复 daytoday 的帖子/ i6 d) I& g% S

牛啊。用蛋白做的，可以透露下你们是那个实验室吗？用的Cell stem Cell文章的条件吗

作者: daytoday 时间: 2012-7-6 09:07

回复 xiphias 的帖子% ~' t& {- M0 Z4 w
% n% r- Y3 u6 R5 r: G# A
美国密西根州一个不起眼的实验室，华人老板，他做了20年的蛋白结构( v" |* V% B2 I0 t2 y
只用SOX2，oct4和Nanog，诱导5天后撤掉蛋白

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