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标题: trizol提取 [打印本页]

作者: luoziwei 时间: 2012-7-3 09:55 标题: trizol提取

RNA用trizol提，在用异丙醇沉淀的时候，是不是可以用酒精代替？多少量？紧急。

作者: eley 时间: 2012-7-3 10:16

应该可以吧，至于用量，就要看你前面提的时候用量了

作者: 不倒翁 时间: 2012-7-3 10:19

没有替换过异丙醇的话是等体积

作者: luoziwei 时间: 2012-7-3 10:25

回复 eley 的帖子3 W6 a0 K" L5 E$ b3 [0 E

你用酒精替换过吗？就是沉淀那一步

作者: lxm5668 时间: 2012-7-3 10:51

替换体积应该是1：1，但是没这样用过，我想应该有差异的，谨慎！

作者: yaolinzhang 时间: 2012-7-3 11:41

我用过等体积的，影响不大

作者: youzi821 时间: 2012-7-3 14:13

luoziwei 发表于 2012-7-3 09:55
( Y. f! [6 s9 @- h5 Y% D1 j3 h! \7 xRNA用trizol提，在用异丙醇沉淀的时候，是不是可以用酒精代替？多少量？紧急。

请用2倍无水乙醇来沉淀

作者: youzi821 时间: 2012-7-3 14:16

youzi821 发表于 2012-7-3 14:13 * Q- s! e" R" n5 ]9 b' Z
请用2倍无水乙醇来沉淀

" r2 v% o# `7 }9 |; x' p# ?& P- |
而且用无水乙醇代替最好-20度沉15分钟或以上

作者: youzi821 时间: 2012-7-3 14:17

注意无RNA酶操作环境

作者: chentian820 时间: 2012-7-4 10:59

3倍体积无水乙醇再加十分之一体积的醋酸铵

作者: luoziwei 时间: 2012-7-4 15:46

回复 yaolinzhang 的帖子6 [8 z- E( B( [; R( ?% H W
; A- g) W% y3 Y( O; o/ S( F
我也用等体积的，沉淀了之后，还用75%的酒精洗了一遍，咋还有230nm的吸收峰呢？

作者: luoziwei 时间: 2012-7-4 15:47

回复 chentian820 的帖子: I4 X! A! d8 g
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请问，加醋酸铵的作用是什么？可不可以加冰醋酸和氨水一起？

作者: avbn 时间: 2012-7-5 11:37

大家方法都挺多的吗，不过有人做过验证吗，有没有差别呢

作者: huangcong1988 时间: 2012-7-5 15:27

个人觉得楼主没必要纠结这个问题，用异丙醇是trizol提取RNA的关键步骤，沉淀RNA用异丙醇就行，干嘛要换成无水乙醇呢？

作者: ielisa 时间: 2012-7-5 16:01

使用异丙醇的话是等体积异丙醇，室温下10min即可，如果你想用乙醇的话，要2倍体积，最好-20℃，30min

作者: linzi214 时间: 2012-7-5 16:50

用异丙醇沉淀不是标准的RNA沉淀方法吗？实验室如果暂时没有的话，可以找别人借一点好了，样本珍贵以前有没有做过预实验的话，尽量不要更换其他试剂和方法了

作者: weiyepan 时间: 2012-7-5 22:36

有机溶剂沉淀都是用脱水的原理处理核酸使其沉淀，异丙醇的脱水效果比乙醇要好，对小分子的RNA来说更加是这样。
不知道楼主提的总RNA还是小分子RNA。如果总RNA的话用乙醇可以，但乙醇比例至少要到66%以上；如果提的是小分子RNA，建议就不要用乙醇了，回收效果不好。5 O0 l8 w/ \, `/ C) h2 Y9 X. a# l; L! z
另外回应一下沉淀的时候加盐的原理，为的是形成核酸的盐沉淀，光是核酸的话很难沉下来的，除非是在等电点附近。加不同的盐有不同的效果，铵离子不能随便加的，对很多后续反应都有抑制作用，和染料更是容易形成复合物改变波长，因此一般都是加钠盐和钾盐。

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