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标题: 关于跨膜分泌蛋白的融合过表达 [打印本页]

作者: runsong 时间: 2012-7-6 19:18 标题: 关于跨膜分泌蛋白的融合过表达

如题，我想将此类蛋白与GFP 融合表达，可以用什么常规载体，构建时有什么原则吗？

作者: 风雪叶杰 时间: 2012-7-8 23:56

感觉这种融合表达会产生问题，因为GFP说实话并不小，对蛋白的折叠会有影响，而且融合蛋白过大也会增加分泌的难度吧？个人意见，仅供参考

作者: weiyepan 时间: 2012-7-10 02:52

融合荧光蛋白为什么要分泌出去啊？楼主是想要什么样的实验效果呢？又不是细胞定位。如果只是看表达筛选的话不如用个化学发光的标签，比如Gluc，seAP之类的。4 X/ g6 L' R& e8 V& I0 x, R! w9 O
我们倒是有两个载体是上面两个蛋白双分泌的，就是不知道你做什么用合不合适。; W- u3 ~8 N2 P' U: D

作者: runsong 时间: 2012-7-10 18:17

回复 weiyepan 的帖子; M! }# O0 [- b* S2 N$ h# w

我要研究的蛋白就是分泌蛋白

作者: weiyepan 时间: 2012-7-10 21:18

回复 runsong 的帖子) {9 h) |& H. {/ I7 u! G: f
e8 P+ ]* }6 i/ S8 H: x
据我所知分泌蛋白都是有信号肽的，不知道你所做的是野生型分泌的还是要融合信号肽分泌出去。
正如2楼所说的，GFP的结构很强，会影响蛋白折叠的可能性也很大，不止是融合蛋白，就连用IRES表达的GFP，对前后的蛋白表达量都有一定的影响的。如果你只是做几个，那么可以试一下，如果是做screen的话，出入就比较大了，结果不一定可信。

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