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标题: 关于人脐带间充质干细胞的几个问题 [打印本页]

作者: leostar131 时间: 2012-7-10 20:12 标题: 关于人脐带间充质干细胞的几个问题

1.在消化细胞时，若终止不完全，即消化过头了，是否对细胞有很大损伤
2.间充质干细胞注入0.9%的NaCl中，过半个小时左右会出现絮状物，这样正常吗？
3.当天取的脐带必须要当天做原代细胞制备吗
4.为什么皿中细胞总是长不均匀

作者: pailishi 时间: 2012-7-11 08:33

1.消化过头肯定会损伤细胞的
2.我们这样做过动物实验，可能是浓度较高的原因所以没有看到过絮状物？0 G1 P, _' b2 D. e# m6 t
3.不一定啊，放几天都没什么问题
4.用酶消化的方法种下去还是比较均匀的

作者: 上帝帮我转运吧 时间: 2012-7-11 08:56

1.不知道用什么酶消化的，酶不一样消化时间也不一样。用胰蛋白酶消化过头对细胞损伤比较大4 A, O; J [3 u& i' T6 ?* x
2.出现絮状物不一定说明有问题，正常情况下也会出现的。
3.最好早点处理，不是当天也可以. b0 D2 [) G: i3 |5 J9 H; g: c f5 e
4.用酶消化的方法种下去还是比较均匀的，但是我们常用机械法做。

作者: 漂泊的风 时间: 2012-7-11 11:13

1.消化过头肯定会损伤细胞的，使其难以贴壁甚至死亡。
2、原因应该是消化的时候用的胰酶浓度太高，消化过快造成絮状，你可以考虑降低胰酶的浓度，效果应该会好的。 G! L I4 ]' h( V) ^* A
3.不是的，放置几天没事的。& d/ v9 Z' o$ }6 C8 o* F
4.你最好接种完后用力把培养皿晃晃，应该可以均匀的。

作者: 漂泊的风 时间: 2012-7-11 11:14

1.消化过头肯定会损伤细胞的，使其难以贴壁甚至死亡。
2、原因应该是消化的时候用的胰酶浓度太高，消化过快造成絮状，你可以考虑降低胰酶的浓度，效果应该会好的。2 p9 g7 @' p! ]4 x% g/ F
3.不是的，放置几天没事的。3 t+ k0 @" y# ] ]* T2 a1 U
4.你最好接种完后用力把培养皿晃晃，应该可以均匀的。

作者: 肖特 时间: 2012-7-11 11:18

1.消化过头对细胞有损伤，损伤的细胞传代后可能会死亡而漂浮在培养基中，通过换液可以除去。
2.絮状物有可能是有死亡裂解的细胞，细胞内的DNA大分子释放出来或形成粘稠絮状，但是具体由什么原因导致有待楼主自己确认。
3.脐带离体后暂时不处理的话可以置于在生理盐水或者培养基中，4度保存。保存多久还能用，这个不清楚，但是最好24h内处理。. a5 u _ l9 M- ~# U
4.皿中细胞不均匀，可能因为接种之前细胞没有混匀，或者培养箱放置不平导致皿中培养基分布不均，培养皿放入培养箱中之后注意观察培养液是否一侧多一侧少。

作者: 王超 时间: 2012-7-11 16:10

我比较赞同楼上几位的观点，关于第四个问题我个人的见解是，首先，用胰酶消化得到的细胞不见得都是单个的，有的仍然是数个细胞在一起的小团块，也可能夹杂着组织间质，所以细胞生长时出现聚集现象；其次，细胞各自的状态不一，不排除不同细胞所处生长周期不同的可能。总体来讲，比起组织块培养，用胰酶消化后种植的细胞密度比前者均匀得多。

作者: leostar131 时间: 2012-7-11 22:52

回复漂泊的风的帖子8 {: {4 I5 x8 {, e

有可能也是我们的培养箱有点歪的原因吧，每次总是一边多一边少。还有加胰酶是不是必须要加终止液啊，终止液可以是什么

作者: leostar131 时间: 2012-7-11 22:53

回复上帝帮我转运吧的帖子7 K4 L1 t# Z. e& U/ t
- {: [" T% v! |* ]# }) n/ H
我在显微镜下看有的细胞已经死掉了，好像DNA都裂解出来了

作者: leostar131 时间: 2012-7-11 22:58

回复肖特的帖子; W4 j2 q& T7 U. t P7 y
1 _' a/ r3 V7 e- {7 b) L- n9 E
是的，这位大侠说的每条都很准确，对我非常有用，我现在很郁闷的事，现在我把胰酶稀释的比例更大了，终止液也加了很多了，可注入盐水袋中5分钟后还是会有沉淀。我还想问一下，是不是细胞放盐水中时间久了都会破裂啊

作者: leostar131 时间: 2012-7-11 23:01

回复王超的帖子

我想问一下这位大侠在撕脐带过程中，如果不小心把其中静脉也撕进去了，长出的脐静脉内皮细胞会很多吗？会影响治疗吗

作者: ditiger 时间: 2012-7-12 09:21

回复 leostar131 的帖子" f6 J' z A( S' n

消化过头对细胞损伤很大，容易使细胞衰老，并不在贴壁，即使贴壁，也会成团生长。$ x4 f- }/ {7 J: M9 S
半小时后会出现絮状沉淀，因为MSC高表达粘附分子啊，所以细胞浓度大的话，慢慢的细胞就会成团，进而成絮状沉淀，但是容易引起心肺栓塞啊！！！要小心使用啊！！！！！！8 a7 _. _3 B* ?7 Z; Q5 K; F* m
当天的脐带最好6小时内做完。$ P2 N6 y* v, L2 c( @9 {# l
皿的细胞长不匀，因为培养箱不平。或者最初铺细胞的时候就没有铺均匀！

作者: 邓子涵 时间: 2012-7-12 09:52

是不是细胞放盐水中时间久了都会破裂啊? 多多长时间为好？那一位说明一下。谢谢

作者: 王超 时间: 2012-7-12 13:00

回复 leostar131 的帖子

这个我不是很清楚，因为原代培养的组织块儿不是我自己亲手取的。我想最好是细胞养好后鉴定一下纯度。

作者: gan-xi-bao 时间: 2012-7-12 15:19

将MSC加入生理盐水是用于治疗吗？为了防止细胞成团可适当加入人血白蛋白。

作者: leostar131 时间: 2012-7-12 17:11

回复 ditiger 的帖子3 _& E) i7 o9 O4 I/ F
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那如果用于治疗是否要速度很快啊，能否加白蛋白啊，或者有其他更好的方法防止他聚集成团吗？

作者: leostar131 时间: 2012-7-12 17:13

回复 gan-xi-bao 的帖子1 r2 {7 r6 u1 x: ?$ j1 b m

如果是治疗，每个人都能加白蛋白吗？哪些人不能加啊

作者: zhangluan 时间: 2012-7-12 17:54

我觉得本来间充质干细胞就有一定的粘附聚集的特性，时间较长聚在一起应该正常吧。放在生理盐水中久的话，没有营养支持肯定会慢慢死掉的呀

作者: 肖特 时间: 2012-7-13 00:02

leostar131 发表于 2012-7-12 17:11 7 e- |$ U/ S/ G( {
回复 ditiger 的帖子
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; k) ]1 Z; u# k5 R5 w那如果用于治疗是否要速度很快啊，能否加白蛋白啊，或者有其他更好的方法防止他聚集成 ...

请问白蛋白终浓度多大合适？

作者: 肖特 时间: 2012-7-13 00:02

回复 gan-xi-bao 的帖子
" W" X! x! D4 Y$ V
请问白蛋白终浓度多大合适？

作者: ditiger 时间: 2012-7-13 08:04

回复 leostar131 的帖子
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白蛋白应该加的，可以使MSCs存活时间长一些，细胞从制备到回输的时间要尽量短，MSCs在生理盐水中最多有4-6小时左右的活性。

作者: leostar131 时间: 2012-7-13 21:59

回复 ditiger 的帖子
7 Z# m ?6 W" v% y+ D
白蛋白大概加多少啊？一般回输之前用盐水洗几遍啊，还有离心转速是多少啊，如果不加白蛋白是否很短时间内会出现絮状物啊

作者: 米儿2003 时间: 2012-8-10 10:46

赞同消化过头会有絮状物，我们做人的脐带，放在4度冰箱可以过夜，加盐水或其它营养液。

作者: firstaider 时间: 2012-9-26 00:16

消化过头肯定对细胞有损伤，损伤的细胞通过换液可以除去。
絮状物可能是死亡的细胞。
脐带离体后可以置于在生理盐水4度保存。
细胞不均匀可能与操作有关

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