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标题: 分MEF [打印本页]

作者: huangcong1988 时间: 2012-7-15 11:22 标题: 分MEF

前一阵子分了一下MEF，感觉分的状态还是不错，但是有一个问题就是，分MEF用的小鼠一定是要cf-1或者其它比较好一点的品种吗？我用昆明小鼠分MEF不行吗？还有就是小鼠孕龄一定要是13.5~14.5d吗？我之前分过一次，是13.5d，小鼠完全没长成型，根本没法分，所以这次分的是孕龄比较大一点的胎鼠，效果还不错，下面附图。想知道就是昆明小鼠分MEF行吗？还有就是胎鼠孕龄一定很严格吗？

作者: huangcong1988 时间: 2012-7-15 11:28

图片分别是：4x10（孕龄较大），4x10（孕龄较小），10x10

作者: 小春 时间: 2012-7-15 14:55

你分MEF细胞是用于培养iPS或者ES细胞的feeder吗？
1、昆明小鼠的feeder我们实验室也做过，感觉培养ES和iPS细胞是没问题的，但是昆明小鼠的遗传背景没有CF-1或者C57的明确，所以，最好还是用推荐的鼠种；( V: s/ `' u. X) z' j
2、我看wicell上面的protocol要求做feeder的MEF细胞最好在13.5天分离，去头、尾、四肢、内脏，只要躯干部位进行后续的消化。- X6 F( v! w* y0 ]5 k. r1 E0 g( C
希望可以帮到你。

作者: wawj 时间: 2012-7-16 00:10

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我们用的就是昆明小鼠，效果不错。关于胎龄，13.5天应该是比较好的。做的胎龄稍大点的，刚开始看着挺好，养几代就老化了。

作者: huangcong1988 时间: 2012-7-16 18:03

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胎龄稍大点的用传代次数较少的不行么？就是说胎龄大的MEF做饲养层行么？

作者: wawj 时间: 2012-7-16 23:33

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也行，那你就不要用第五代的了，第三代的就还行，四代可能就不咋好了。

作者: huangcong1988 时间: 2012-7-17 11:23

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en ,谢谢，上图状态还行吧？

作者: 刘森泉 时间: 2012-7-18 13:29

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请问你是用什么方法分的MEF，看上去不错噢。

作者: wawj 时间: 2012-7-18 14:01

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还好可能还得再养一代

作者: huangcong1988 时间: 2012-7-24 07:39

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我这个是用酶消化分的，当时我看的时候感觉还是不错，分出来不少，但是冻存复苏后还是死了很多，酶消化法我看有很多变异，就是同样是酶消化，但是很多人消化时间，胰酶浓度，还有分次消化等等，都不一样

作者: huangcong1988 时间: 2012-7-24 07:39

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我这个是用酶消化分的，当时我看的时候感觉还是不错，分出来不少，但是冻存复苏后还是死了很多，酶消化法我看有很多变异，就是同样是酶消化，但是很多人消化时间，胰酶浓度，还有分次消化等等，都不一样

作者: nichifanlema2 时间: 2012-7-24 09:45

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您好，请问您养的是人ES或iPS吗？我养人的ES和iPS能用昆明小鼠品系的MEF做饲养层吗？谢谢啊~~

作者: wawj 时间: 2012-7-24 14:42

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我养的是鼠的，人的不知道效果好不好，好像大部分都在用CF-1小鼠。

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