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标题: 细胞养了2年了，没碰到过这样的情况，大家帮帮忙吧！ [打印本页]

作者: yuhaoze 时间: 2012-7-20 12:28 标题: 细胞养了2年了，没碰到过这样的情况，大家帮帮忙吧！

本帖最后由 yuhaoze 于 2012-7-20 12:32 编辑 6 `; Q9 \( z& ]* M% q4 K

最近养癌细胞，出现问题：以前的做法是，加上胰酶洗一遍，再加胰酶消化，一直到漂，然后终止消化，细胞状态很好。现在同样的做法，不管消化多长时间，细胞都贴在那里不往下掉，一吹打细胞就碎，没一个活的。2 G) B0 M/ `' z+ C
不知道问题出在什么地方，怎么解决
大家有没有遇到同样的问题

作者: coffee.cat105 时间: 2012-7-20 12:37

你用的什么公司的胰酶、

作者: yuhaoze 时间: 2012-7-20 12:40

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sigma,一直都是这个，你觉得是胰酶的问题？

作者: yuhaoze 时间: 2012-7-20 12:40

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加上之后倒还真是能看出来有点类似凋亡的特征，但实验室其他人说胰酶很好用啊

作者: coffee.cat105 时间: 2012-7-20 12:47

我们用Hhclone的胰酶也出了问题了，形态什么的都可以，就是流式检测抗体标记不上，正头大呢，所以问问你

作者: WAX 时间: 2012-7-20 13:34

你的胰酶是不是粉末自己配制的，如果是，有可能是过保质期，胰酶失效了，消化能力差，损伤了细胞却消化不下来，我们以前遇到过类似的情况

作者: yuhaoze 时间: 2012-7-20 14:14

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如果是这样的话那真需要警惕了

作者: WAX 时间: 2012-7-20 14:55

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粉末也是会过期的，用个两年就差不多了，买一瓶新的吧

作者: yuhaoze 时间: 2012-7-20 15:42

回复 WAX 的帖子# m2 E) y/ j9 [! A! ]
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好的'谢谢

作者: wangzhiqi86 时间: 2012-7-20 16:01

回复 yuhaoze 的帖子2 M9 q7 Z$ z0 D6 j
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极有可能是胰酶时间长了之后失活所致，我之前也是在37℃预热时间长了之后细胞怎么也消化不下来，建议你再重新用胰酶粉末再过滤配一瓶试试，里面EDTA也要加的。# ` \. B1 z: `& H( O. z
我的经验是，每次预热的时候，胰酶最后预热，不要超过5min，甚至可以放在室温一段时间就行。很多胰酶并不是在4℃放的时间长了失效的，而是经常性预热失活的。; F$ x9 H3 T6 H% J
胰酶用的是Invitrogen的，一瓶粉末可以用很长时间。配成2×的过滤后分装冻存在-20℃，用的时候再解冻，一个月内没问题。

作者: lchoxy 时间: 2012-7-20 17:39

胰酶没问题的话，那就是细胞的问题，细胞老化了，或者是分化了，都会影响消化的。

作者: 184lj 时间: 2012-7-21 10:27

细胞状态不好的时候就会出现这种情况，比如老化，凋亡，或者是受到支原体的污染。

作者: happyab 时间: 2012-7-21 12:21

你最好先确定胰酶是否过期失效或配比错误、甚至不同厂家都有可能！再确定陪养基的成分是否有和胰酶冲突的成分，陪养环境是非设定有误！如果都不是外围环境问题，就恭喜你发现稀有样品！

作者: dahui 时间: 2012-7-21 12:42

回复 yuhaoze 的帖子0 O9 Q* b, N! J$ C% ^
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对呀，，没准谁用了你的胰酶，并且还没发回冰箱，结果发现后，偷偷给你放回去了，但是他却没告诉你这个经过。$ D0 c3 f5 \' O. p
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或者是细胞传代次数太多了，生长状态不行，我之前养的293T或vero，就是细胞状态很差时就会贴的死死的，消化不下来，如果加长消化时间，细胞是下来了，但是大部分都死了

作者: lugu167 时间: 2012-7-21 13:49

我的作法是：小体积分装（比如10ml）， -20℃冻存，一旦溶解存放4℃，一般一周内用完，从来没有出过问题。

作者: franklinhg 时间: 2012-7-25 12:00

一般是胰酶问题，肿瘤细胞最好养了。

作者: 小猪快跑 时间: 2012-7-25 13:35

检验胰酶你可以用它消化一下别的细胞看好不好用啊。也有可能是细胞的问题呢，我以前养过MSC,跟你的情况一样，怎么消化都不下来，同实验室的用的都很好，自己消化别的细胞也没问题，我感觉是细胞可能有问题，但一直没找到原因。希望你的问题解决以后我以后也能做个参考！！

作者: yuhaoze 时间: 2012-7-25 20:25

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嗯，谢谢！

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