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小渝

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楼主

发表于 2012-7-22 10:03 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

各位前辈，想请教下神经干细胞NESTIN鉴定的具体操作呀！不是很清楚悬浮的细胞怎样爬片呀？爬片的时候大概需要培养多久呀？新手很多不懂，还请前辈们赐教呀！非常感谢！

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wgmzky

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沙发

发表于 2012-7-26 10:52 |只看该作者

首先,用多聚鸟氨酸和laminin包被coverslip,放在24孔板里,然后将悬浮的球种上去,也可以种植消化后代单细胞,贴壁之后,按照标准的ICC的protocol进行免疫染色.如果包被的好,两个小时细胞或球就能贴的很好,如果不放心就等时间长一些没有关系,等到你觉得细胞贴的很紧之后再做染色.爬片时培养基中最好不要加肝素,因为它有抑制细胞贴壁的作用.