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标题: 关于bFGF配制 [打印本页]

作者: huangcong1988 时间: 2012-7-24 22:13 标题: 关于bFGF配制

买的peprotech的生长因子bFGF，说明书上写的是用5mM Tris，PH7.6 溶，如果想冻存在负20或者负80的话，就加0.1%的BSA。但是我看坛子里面有战友说可以直接用PBS溶或者直接用超纯水溶。还有战友说保存的话直接用0.1%的BSA溶。我想知道能不能先配好BSA，然后将生长因子溶到BSA中（不用Tris 盐酸配），然后分装后冻存，这样可以吗？还有就是BSA浓度一定要0.1%吗？我用0.15%的行不行？

补充内容 (2012-7-25 09:03):
说明书上写：reconstitute in 5mM Tris ，PH 7.6 。for extended storage， further dilute in a buffer containing 0.1%BSA（or more）。这里，是先要溶解到Tris盐酸，再溶解到BSA中才能冻存是吧？

作者: flydayzhu 时间: 2012-7-24 23:46

BSA加高一点没问题的，主要是增大蛋白浓度防止bFGF变性的~~~一般我们是用PBS+0.1%BSA将其配成10000x的储液然后分装冻存，用的时候就化一个，一般一周左右用完一个~

作者: 天枰2012 时间: 2012-7-25 08:05

BSA可以防止bFGF降解，是保护剂。可以像你说的那样

作者: 寒山拾得 时间: 2012-7-25 08:17

CF （carrier free）的用PBS+0.1%BSA溶解，
有的自带carrier（BSA）冻干的，用PBS溶就可以。

作者: huangcong1988 时间: 2012-7-25 08:57

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是peprotech的吗？说明书上是写用Tris 盐酸啊，那溶解的时候是不是是不是也应该用Tris 盐酸呢？还有就是直接用配好的BSA（0.1%）溶bFGF呢？

作者: huangcong1988 时间: 2012-7-25 09:04

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说明书上写：reconstitute in 5mM Tris ，PH 7.6 。for extended storage， further dilute in a buffer containing 0.1%BSA（or more）。这里，是先要溶解到Tris盐酸，再溶解到BSA中才能冻存是吧？

作者: huangcong1988 时间: 2012-7-25 09:07

回复 flydayzhu 的帖子0 M. K) x- K9 G0 K+ ?$ i, A
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还有一点就是我BSA是先配好的，如果先用Tris盐酸配bFGF，再把BSA加到bFGF中，那bFGF跟BSA的浓度不是都会减低吗？

作者: huangcong1988 时间: 2012-7-25 09:09

回复 flydayzhu 的帖子) e; ~: w& ^# k' R2 `
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说明书上的推荐浓度是0.1~1mg每ml，总共10μg，那么加100μl的buffer就够了？

作者: flydayzhu 时间: 2012-7-25 09:17

回复 huangcong1988 的帖子2 d+ k1 y5 E0 @9 ~3 U
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用过peprotech的，也用过其他公司的，个人觉得pH在那的话影响不会特别大，然后一次不要溶太多~~~先配好0.1%BSA再溶解吧~~

作者: flydayzhu 时间: 2012-7-25 09:18

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加100ul含0.1%BSA的buffer

作者: 漂泊的风 时间: 2012-7-25 10:54

我觉得BSA可以不用的吧，除非你是长时间保存，一般情况下，短时间就用的话可以直接用PBS配置。

作者: huangcong1988 时间: 2012-7-25 15:35

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直接加100μl 的BSA？然后分装的话，用PCR管装，一个管里装10μl吗？是不是太少了？能不能比他推荐浓度低呢？母液的话，浓度那么高，到时候加到培养基中的时候量就很少，那么就不容易混匀，您一般怎么配制这个呢？

作者: flydayzhu 时间: 2012-7-25 19:31

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我们用的量比较大，一般都分装成100ul或50ul的，然后配培养基一般是一两百ml 配的。。。

作者: huangcong1988 时间: 2012-7-26 07:54

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分装成100μl？那就是配的时候加1mlBSA了？那母液浓度不是比说明书上推荐的浓度要低吗？这样可行吗？

作者: flydayzhu 时间: 2012-7-26 09:42

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不是的，我们一般都是买500ug或1mg的包装的

作者: fananran2003 时间: 2012-7-26 10:17

意见与沙发相同，0.1%的BSA配成浓储，分装冻存！按你平时配一次所需的量分装，一次一管，

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